酵母菌杂交育种1课件.pptVIP

酵母菌杂交育种 目录 一酵母菌杂交特点 1酵母菌的细胞结构和菌落形态 2酵母菌的生活史和繁殖方式 3酵母菌的杂交 二酵母菌杂交育种的方法 标记菌株的选择 酵母菌杂交 拓展：酵母群体杂交育种方法 一酵母菌杂交特点 1酵母菌细胞结构和菌落形态 酵母菌（yeast）是低等真核微生物，分属于子囊菌纲、半知菌纲和担子菌纲。大多数酵母菌为单细胞，一般呈卵圆形、圆形或圆柱形。细胞结构类似于高等生物，细胞壁的主要成分为葡聚糖和甘露糖，此外还有蛋白质和脂类等。酵母细胞除细胞壁之外还有细胞核、核膜、核仁等结构。大多数酵母的菌落和细菌相似， 酵母菌的细胞结构与细菌相似，但比细菌细胞大得多。一个椭圆形的酵母菌细胞长约7.2um，宽5.6nm(圆形直径1—5um) . 菌落大而厚，菌落表面湿润、粘稠并多呈乳白色，少数为红色。 菌落特征 表面湿润、粘稠，大多数是乳白色，少数红色（红酵母），在固体培养基上生长时间长了，颜色变暗，呈绉缩状。 酵母菌的生殖方式 　酵母菌可以进行无性生殖，也可以进行有性生殖。无性繁殖包括芽殖、裂殖(即少数种类的酵母菌与细菌一样，借细胞横分裂而繁殖)、芽裂(这种方式很少)三种。其中最主要还是出芽生殖(简称芽殖)，即成熟的酵母菌细胞先长出一个小芽体，芽体细胞长到一定程度脱离母细胞继续生长，而后形成一个新个体。有性生殖是以形成子囊孢子的方式进行。 3酵母菌的杂交 酵母菌的杂交最主要通过有性杂交，利用两种不同结合型的单倍体菌株或子囊孢子进行的。有的酵母如假丝酵母等不具有性生殖，即不产生子囊孢子，它们的杂交与霉菌一样，是通过准性生殖进行的。酵母菌杂交一般是指异接合型菌株杂交。杂交过程包括子囊孢子接触，结合，合子形成，直至二倍体细胞出牙为止的一系列过程。杂交步骤包括遗传标记菌株的选择和不同遗传标记的异接合型细胞杂交。 二酵母菌杂交育种的法 1 标记菌株的选择 常用的标记是营养缺陷型或抗性突变基因 1．营养缺陷型标记 2．抗性标记 3．温度敏感性标记 4．其他性状标记 如孢子颜色、菌落形态结构、可溶性色素舍量、代谢产物产量高低和代谢返速度快慢等，以及利用的碳、氮原种类、杀伤力等其他性状都可以作为重组体检出的辅助性标记。 营养缺陷型菌株的筛选过程 营养缺陷型菌株的筛选一般要经过诱变、淘汰野生型菌株、检出缺陷型和确定生长谱四个环节。 １诱变剂处理 诱变剂处理时与其它诱变处理基本相同。在诱变处理后的存活个体中，营养缺陷型的比例一般很低，通常只有百分之几至千分之几，采用抗菌素法或菌丝过滤法，可以淘汰为数众多的野生型菌株，从而达到浓缩营养缺陷型的目的。 ２ 淘汰野生菌的方法 1.抗生素法 2.菌丝过滤法 ２．１抗生素法：是利用野生型菌株能在MM中生长，而缺陷型不能生长，于是将诱变处理液在MM中培养短时让野生型生长，处于活化阶段，而缺陷型无法生长，仍处于“休眠状态”，这时，加入一定量的抗生素，结果活化状态的野生型就被杀死，保存了缺陷型。在选择抗生素时，细菌可以用青霉素，酵母可用制霉菌素。 2．２菌丝过滤法：只适用于丝状真菌，其原理是在基本培养基中，野生型的孢子能发芽成菌丝，而营养缺陷型则不能。因此将诱变处理后的孢子在基本培养基中培养一段时间后，再进行过滤。 如此重复数次后，就可以除去大部分野生型菌株，同样达到“浓缩”营养缺陷型的目的。? 具体方法：影印法、点种法、夹层法 、限量补充培养法 夹层培养法 限量补充培养法 影印接种法 逐个检出法 ３营养缺陷型的检出方法 酵母菌的杂交 子囊孢子的制备：（以高产率酿酒酵母为例） 诱导孢子形成的方法 将酿酒酵母菌株于YPD固体斜面上28℃培养48h活化，活化两次后接入产孢培养基，25℃培养3一7天，在显微镜下观察子囊孢子形成情况，计算一个视野内酵母总数和子囊孢子数，并计算产孢率。 产孢率(%)=子囊孢子数量/总细胞数 注：YPD 为酵母膏胨葡萄糖琼脂培养基 子囊孢子分离和单倍体的获得 菌株活化后接入产孢培养基，3天后镜检观察，无菌水(2ml)倾于斜面上，用接种环刮下菌体，收集菌悬液于7ml离心管中，6000rpm离心 10min收集菌体。0.85%生理盐水悬浮洗涤1~2次，分别加入 0.7mlTris一Hcl(pH8.0，0.01M);200ul 10%蜗牛酶(终浓度为0.02):l00ul 10%琉基乙醇(终浓度为0.01)，120rpm(缓慢振荡)培养16h破子囊壁，使孢子释放。利用孢子比营养细胞耐热特性，采用58℃高温致死处理营养细胞，离心收集孢子，并用Tris一HCI(pH8.0，0.01M)洗涤两次。取适当稀释倍数，涂布于YPD平板上，2