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创新项目名称 青海西芹的研究与产品开发 项目指导教师：王欢 项目负责人：王志波 项目成员：李成思 项目研究目标 1.西芹中总黄酮的提取工艺研究及含量测定 1.1 标准曲线的绘制 1.2 提取剂浓度对总黄酮收率的影响 1.3 料液比对总黄酮收率的影响 1.4 提取时间对总黄酮收率的影响 1.5 提取次数对总黄酮收率的影响 1.6 正交实验确定西芹中总黄酮的提取工艺及含量 2.西芹中西芹素的定量测定 2.1 色谱条件测定 2.2 线性关系考察 2.3 精密度试验 2.4 重复性试验 2.5 稳定性试验 2.6 加样回收率试验 2.7 样品含量测定 1.1标准曲线的绘制 精密吸取芦丁标准溶液0.0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml分别置于25ml容量瓶中，分别在510nm处测定其吸光度。结果见表1.1。 表1.1 不同浓度芦丁标准溶液的吸光度 根据上表数据，以吸光度A为纵坐标，以芦丁标准溶液的浓度C ( mg/ml)为横坐标绘制标准曲线，见图1.1。得到芦丁浓度C与吸光度 A关系曲线,其线性回归方程式为：y=8.1259x+0.0023，相关系数R2=0.9996。 图1.1 芦丁标准曲线 1.2提取剂浓度对总黄酮收率的影响 精密称取西芹茎叶混合粉末1.0000克各5份，分别置于250ml锥形瓶中，各自按照料液比1：20分别加入40%，50%，60%，75%和90%乙醇，超声提取时间为30min。根据2.3项下的方法将提取后的溶液进行处理，制备供试品溶液，分别在510nm下测出吸光度，以乙醇浓度为横坐标，以吸光度A为纵坐标作图，见图1.2，测定结果见表1.2。 表1.2 提取剂浓度对总黄酮收率的影响 图1.2 提取剂浓度对总黄酮含量的影响 实验结果表明，50%乙醇提取效果最好 1.3料液比对总黄酮收率的影响 精密称取粉碎好的西芹茎叶混合原料1.0000克5份，分别置于锥形瓶中，按照料液比1：10，1：15，1：20，1：25和1：30，加入50%乙醇，超声提取时间30min。制备供试品溶液，分别在510nm下测定吸光度，以料液比为横坐标，吸光度A为纵坐标，见图1.3，测定结果见表1.3。 表1.3料液比对总黄酮收率的影响 图1.3料液比对总黄酮提取率的影响 实验结果表明，料液比1：20提取效果最好 1.4 提取时间对总黄酮收率的影响 精密称取西芹茎叶混合原料1.0000克5份，分别置于锥形瓶中，按照料液比1：20依次加入50%乙醇,按照提取时间30min,40min,50min，60min,70min进行超声提取。分别在510nm下测出吸光度，以提取时间为横坐标，吸光度A为纵坐标，见图1.4，测定结果见表1.4。 表1.4提取时间对总黄酮收率的影响 图1.4提取时间对总黄酮收率的影响 结果表明，提取时间为50min，提取效果最好 1.5提取次数对总黄酮收率的影响 表2.5提取次对总黄酮收率的影响 精密称取西芹茎叶混合原料粉末1.0000克各4份，分别置于锥形瓶中，按照料液比1：20依次加入50%乙醇，提取时间均设定为50min。分别按照提取次数1次，2次，3次，4次进行超声提取，分别合并提取液，分别在510nm下测定吸光度，以提取次数为横坐标，吸光度A为纵坐标，见图1.5，测定结果见表1.5。 测定结果见表1.5 图1.5提取次对总黄酮收率的影响 实验结果表明，随着提取次数增加，总黄酮含量升高，但提取3次后，含量变化曲线已较为平缓。考虑到生产工艺对时间的要求和溶剂的损耗，提取次数以 3次以内为宜，故本实验选取提取3次为总黄酮含量的提取次数。 1.6正交实验 以上讨论了各单因素影响，根据每种单因素的最佳条件，为每个单因素设定提取的最佳范围，即当提取剂为50%乙醇，料液比为1：20，提取时间为50min，提取次数为3次时，提取效果最好。但在实际操作中，各因素之间相互交叉影响。因此，为了全面考察影响因素，选择L9(34)正交表，以乙醇浓度，料液比，提取时间和提取次数为4因素，做3水平正交实验，正交实验因素水平表见表1.6。正交实验结果见表1.7。方差分析结果见表1.8。 表1.6正交实验因素水平表 表1.7正交实验结果直观分析表 1.6正交实验 表2.8方差分析结果表 实验结果表明，由表2.8可知，影响西芹总黄酮提取的主