花粉花药的离体培养.pptVIP

花粉和花药的概念 花粉：是种子植物特有的结构，相当于一个小孢子和由它发育的前期雄配子体。 花药：是指花丝顶端膨大呈囊状的部分，是雄蕊的重要组成部分。 两者的异同点 培养目的相同，均获得小孢子植株。 花药培养属于器官培养；而花粉培养属于细胞培养。 花粉培养没有药壁组织干扰；可计数小孢子产胚率；可观察雄核发育的全过程；单倍体产量高。但技术更复杂 花药和花粉培养基本流程： 选择合适的供体植株 花粉花药的离体培养的作用 1、作物育种 （1）缩短育种周期：常规育种需4-6年获得纯系，而小孢子培养仅需一年。 （2）提高了目标基因型的选择效率例子： 例子：二倍体供体植株基因型为AaBb，若要从后代中选择基因为AAbb的纯合单株 常规方法： AAbb出现的概率为1/16，并且不能将AAbb与Aabb、aAbb区分开。 单倍体方法： AAbb出现的概率为1/4。 （3）诱变育种中的作用 植株不受显隐性的影响，在诱变育种中能在当代及时获得突变个体，加倍后成为稳定的纯系。 2、物种进化研究 可探索亲本染色体组的构成。分析单倍体植物减数分裂时，形成二价体的数目和形状，能确定染色体组内是否存在同源染色体。 3、遗传分析 单倍体植株中基因不受显隐性的影响，每一个基因的作用均能表现出来。能用来研究基因的性质及其作用。还可用于基因的剂量效应分析。 4、构建连锁图谱 双单倍体（DH）群体是永久性群体，能有效地用于遗传图谱的构建 5、用于遗传转化 能直接表达外源基因，不受显隐性影响 影响雄核发育和花粉花药培养的因素 （一）基因型 植物基因型是影响雄核发育的最重要的因素之一。同一物种中的不同基因型对小孢子离体诱导反应差异较大。 如在水稻中，籼稻花粉培养力远低于糯稻。 （二）供体植株生长条件和生理状态 1、植株生长条件 光温等因素均能影响花药培养力。一般处于适宜生长条件（如温室中）较好。但物种间存在差异。 2、植株生长时期 一般是开花始期优于开花末期。 3、P花粉的频率 不同温度、日照时数、氮饥饿及生长物质处理提高P花粉的数量 （三）花粉发育时期 小孢子发育时期对诱导雄核发育非常重要。 一般而言，单核期（第一次有丝分裂前）对诱导反应最敏感，为最佳培养期。 形成双核后，在合适的条件，主要由营养细胞分裂产生胚状体。 不同物种诱导胚胎发生的最佳小孢子发育时期 （四）预处理 预处理是小孢子培养成功的前提条件 预处理目的：是改变小孢子的发育方向，使尽可能多的小孢子从配子体发育途径转向孢子体发育途径（即成为具胚胎发生潜力的小孢子）。适当的预处理能使绿苗产量大量增加。 预处理方法：主要是对花药进行适度的逆境处理，包括低温、高温、化学物质、离心、射线等。  （五）培养基 1.基本培养基 主要为N6和MS培养基。在此基础上发展出一些其它的培养基。如H培养基（适于烟草）、C17培养基（适于小麦）、马铃署-Ⅱ培养基（适于马铃署） 2.碳源 包括蔗糖、麦芽糖、纤维二糖、葡萄糖、果糖、海藻糖等。不同作物所需最适的碳源种类及浓度的所差异。一般认为单子叶植物比双子叶植物需糖的浓度要高。玉米中蔗糖效果最好；而麦类作物中，麦芽糖似乎为最好的碳源。 3、激素 4、氨基酸 5、活性碳 6、pH （七）花药壁因素 花药组织的存在对小孢子的胚性分裂具有明显的促进作用。但花药壁损伤会释放有毒物质影响小雄核的发育。 * * 花粉花药的离体培养 第一组 小组成员：王睿 钟芳 范敏 邹婉莹 孟心月 荣乂 预处理花药（物理或生理逆境） 收集具胚性小孢子的花药，或离心收集胚性小孢子 培养（充足的营养、合适的温光、或条件培养）形成胚状体 胚状体转移至固化培养基上”萌发”形成小植株。 倍性鉴定或染色体加倍 供体亲本AaBb 花培 单倍体 二倍体 AB------ -------------------- AABB aB---------------------------- aaBB Ab---------------------------- AAbb ab-- -------------------------- aabb 发育时期 物种 减数分裂期 草莓、番茄 四分孢子期 葡萄 单核早中期 石刁柏、油菜、大麦、天仙子、马铃薯 单核晚期 荔枝、茄子、青椒、小麦 单核早期至晚期 烟草 单核早期至双核期 梨、水稻、甘蓝 四分孢子期至双核期 玉米 *