一种新型的截短型转化生长因子βⅡ型受体在大肠杆菌中的表达及活性.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，２９（８）：３３～３７ 一种新型的截短型转化生长因子 型受体在 βⅡ 大肠杆菌中的表达及活性鉴定 １，２ １ ３ １ １ １ 初彦辉 　刘海峰 　王小花 　张羽飞 　武　艳 　袁晓环 （１牡丹江医学院黑龙江省抗纤维化生物治疗重点实验室　牡丹江　１５７０１１） （２暨南大学生命科学与技术学院　广州　５１０６３２　３牡丹江医学院病原生物学实验室　牡丹江　１５７０１１） 摘要　克隆人源的截短型转化生长因子 型受体（ｔＴＧＦ Ｒ ），成功构建高效稳定的大肠杆菌 βⅡ ?β Ⅱ 表达菌株。采用ＰＣＲ技术扩增得到目的基因ｔＴＧＦ Ｒ ，插入原核表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ３的相应位 ?β Ⅱ 点，并在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中获得高可溶性表达的重组蛋白，重组蛋白ＧＳＴｔＴＧＦ Ｒ 经 ? ?β Ⅱ ＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析纯化后，再经凝血酶酶切，然后经ＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ纯化 ? ? 获得目的蛋白ｔＴＧＦ Ｒ ，ＳＤＳＰＡＧＥ分析表明：可以通过ＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析纯化 ?β Ⅱ ? ? 得到ＧＳＴｔＴＧＦ Ｒ ，其分子量约３７．０ｋＤａ，和 目的蛋白ｔＴＧＦ Ｒ ，分子量为 １１．０ｋＤａ。 ? ?β Ⅱ ?β Ⅱ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示ＧＳＴｔＴＧＦ Ｒ 和 ｔＴＧＦ Ｒ 为特异性蛋白。运用基因工程的方法获得 ? ?β Ⅱ ?β Ⅱ ｔＴＧＦ Ｒ 目的蛋白，对瘢痕成纤维细胞增殖具有很好的抑制作用。 ?β Ⅱ 关键词　转化生长因子 型受体　瘢痕成纤维细胞　表达　纯化 βⅡ 中图分类号　Ｒ３９２．１１ 　　转化生长因子 （ＴＧＦ ）是一种分布广泛的细胞 合，而ＴＧＦ Ｒ 必须在ＴＧＦ Ｒ 与ＴＧＦ 结合条件 β ?β ?β Ⅰ ?β Ⅱ ?β 因子，从蠕虫类到哺乳动物，几乎所有细胞均可合成 下才能与ＴＧＦ 结合。因此，ＴＧＦ 的生物学功能取 ?β ?β 决于 ［４］ ＴＧＦ 的活化和ＴＧＦ Ｒ 的存在 。对ＴＧＦ ＴＧＦ 并表达相关受体；它参与了细胞的生长分化，组 ?β ?β Ⅱ ?β ?β 织器官的胚胎发育，损伤的修复等多种生物学效应，特 Ⅱ型受体的研究表明，ＴＧＦ?βⅡ型受体细胞内片段富 含丝氨酸／苏氨酸激酶位点，是ＴＧＦ 细胞内信号转导 别是在胶原蛋白的表达和细胞外基质（ＥＣＭ）的聚集或