食源性肠球菌荧光定量PCR检测方法的建立与评价-食品与生物技术.PDF

第30 卷第5 期 食 品 与生 物 技 术学 报 Vol. 30 No.5 2011年9 月 Journal of Food Science and Biotechnology Sept 2011 : 1673-1689( 2011)05-0779-09 食源性肠球菌荧光定量PCR 检测方法的建立与评价 1 * 1 1 2 1 吴晨璐 , 施春雷 , 周敏 , 杨捷琳 , 史贤明 ( 1. 上海交通大学 农业与生物学院, 上海200240; 2. 上海出入境检验检疫局, 上海200135) : 利用基因组序列比 分析等生物信息学方法发掘肠球菌新的属特异性靶点, 根据 42 个候 选靶点序列设计50 引物, 结合普通PCR 初筛和荧光定量PCR 复筛, 挑选特异性和灵敏度等检 测性能最佳的引物,建立相应的荧光定量PCR 检测方法, 并 该方法应用于食品中肠球菌检测时 的效果作出评价分析结果显示,特异性最强的引物为EF1902,利用该引物建立的荧光定量体系 检测肠球菌时均产生特异性扩增信号,而检测非肠球菌菌株时均无特异性扩增信号形成经优化 PCR 体系后, 该方法的基因组DNA 检测灵敏度为1378 拷贝/PCR, 纯培养物灵敏度为384 cfu/ PCR以肠球菌人工污染牛奶, 当初始接菌量为263 cfu/ L 时, 只需增菌6 h 即可用该方法检出 肠球菌 52 份食品样品进行检测准确率为9423%, 证实了该方法可应用于食源性肠球菌的快 速检测综上所述,作者建立的肠球菌荧光定量PCR 方法,特异性强且灵敏度高, 可应用于食品中 肠球菌的快速检测 : 肠球菌; 荧光定量PCR; 检 靶点 : TS 2077 : A Development and Evaluation of a Real-Time PCR System for Ent erococcus spp Detection in Food Samples 1 * 1 1 2 1 WU Chen-lu , SHI Chun-lei , ZHOU Min , YANG Jie-lin , SHI Xian- ing ( 1. School of Agriculture and Biology, Shanghai Jiao Tong U niversity, Shanghai 200240, China; 2. Shanghai En- try and Exit Inspection and Quarantine Bureau, Shanghai 200135, China) A stract:The ai of the study was to explore new detective targets for Enterococcus spp, with better perfor ance in specificity and sensitivity, and subsequently to develop a rea-l ti e PCR ethod which could be effectively applied to rapid quantitativedetection of enterococci. Geno ic co parative analysis a ong Enterococcus and non-Entercoccus strains was conducted to screen the specific targets for enterococci, and 42 target frag ents were selected for the design of