一、苷的结构研究.ppt

?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? * * ?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? * * 天然药物化学 第三章 糖及苷类化合物 第四节 糖和苷的提取分离 一、糖类的提取分离 （一）提取 （二）分离纯化 1.分级沉淀法 2.蛋白质沉淀法 3.透析法 4.凝胶色谱法 5.离子交换色谱法 6.大孔吸附树脂法 7.其他方法 （三）提取分离实例 二、苷类的提取分离 * （一）糖的提取方法 主要为溶剂法——水、稀醇（单糖、低聚糖、多糖） 糖类的提取可根据它们对乙醇和水的溶解度不同，采用冷热水、冷热稀醇等提取。 一、 糖的提取与分离 第四节 糖和苷的提取分离 * 注意事项： 在提取过程中应防止共存于植物体内的酶的作用。 抑制酶的方法有： ①加入无机盐，如1%左右的CaCO3； ② 加热回流提取 在中性条件下提取 第四节 糖和苷的提取分离 石油醚或丙酮脱脂 中药粗粉 滤液 脱脂中药粗粉 加碳酸钙，拌匀，用50%乙醇温浸2次，合并浸液， 减压回收溶剂至小体积，低温放置过夜，滤过 沉淀物 （脂溶性杂质） 减压回收成稠浆后， 用乙醇或稀乙醇温浸 不溶物 无机盐、蛋白质等 醇浸出液 减压回收至小体积，活性炭脱色 活性炭渣 (色素等) 醇溶液 回收乙醇 糖混合物 提取单糖及 低聚糖的方法 * 中药粗粉 热水提取，提取液浓缩 提取液 粗多糖沉淀 溶液 在提取液中滴加乙醇 提取多糖的方法 第四节 糖和苷的提取分离 * （二）糖的分离方法 1. 活性炭柱色谱 2. 大孔树脂色谱 3. 纤维素色谱 4. 分级沉淀和分级溶解法（蛋白质除去法） 5. 凝胶色谱法 6. 电泳法 7. 超离心法 第四节 糖和苷的提取分离 * （一）苷类的提取 1、前处理：根据提取目的进行前处理 原生苷的提取 抑制酶活性方法： （1）甲醇或乙醇提取 （2）沸水提取 （3）原料药材中拌入无机盐，如碳酸钙 次生苷的提取 控制和利用酶活性，利用酸或碱水解，发酵等 二、苷类的提取与分离 第四节 糖和苷的提取分离 第五节 糖和苷的结构研究 一、多糖和苷的纯度测定 二、多糖和苷的分子量的测定 三、糖的种类和数目的测定 四、苷分子中苷元和糖、糖和糖之间连接位置的确定 五、糖和糖之间连接顺序的确定 六、苷键构型的确定 七、多糖类化合物研究实例 * 一、 苷的结构研究 （一）物理常数的测定 熔点、比旋度 （ 二）分子量和分子式的测定 常用质谱中的FD-MS、FAB-MS法测定 （三）苷元和糖的鉴定 苷用稀酸水解得到苷元和糖后，分别鉴定结构。 第五节 糖和苷的结构研究 * 1. 苷元的结构鉴定 2. 糖的种类鉴定 一般是将苷键全水解，用PC、TLC检出单糖的种类，经显色后用薄层扫描法求得各种糖的分子比。 也可用GC或HPLC对单糖定性定量。 NMR 3. 糖基数目的测定 第五节 糖和苷的结构研究 * （四）糖和糖之间连接顺序的确定 1. 部分水解法 2. 波谱分析法 第五节 糖和苷的结构研究 * （五）苷元和糖、糖和糖之间连接位置的确定 1.苷元和糖之间连接位置的确定 13C-NMR用于确定苷元和糖之间的连接位置 苷化位移：糖与苷元成苷后，糖端基碳和苷元的α-C， β-C化学位移均发生了变化，这种苷化前后的变化称 为苷化位移。 第五节 糖和苷的结构研究 * 醇苷：α-碳低场移动（4-10ppm） β-碳高场移动（-0.9－-4.6ppm） 酚苷：α-碳高场移动 β-碳低场移动 第五节 糖和苷的结构研究 * 2. 糖和糖之间的连接位置的确定 化学方法和NMR法 （1）化学方法 将糖链全甲基化?水解?甲基化单糖的定性和定量（TLC 或GC鉴定） （甲基化后单糖中游离-OH的部位就是连接位置） 第五节 糖和苷的结构研究 * （2）NMR法