茶树基因芯片的研制和初步应用.PDFVIP

维普资讯 茶 叶 科 学 2006，26(3)：166～170 JournalofTeaScience 茶树基因芯片的研制和初步应用 赵丽萍 ，高其康 ，陈亮 ，王新超 ，姚明哲 (1 中国农业科学院茶叶研究所茶树资源遗传改 良与分子生物学实验室 ／农业部茶叶化学工程重点实验室，浙江 杭州 310008 2 浙江大学分析测试 中心生物大分子研究室 ，浙江 杭州 310029) 摘要：利用EST计划获得的 1680个基囚片段 ，制备了国内外首张茶树cDNA芯片，芯片 卜每个基囚设置一个 重复，共含有 6912个点，其中6720个靶基因，160个阳性对照，32个阴性对照。4~4矩阵点制 ，共两个区 域 ，每个区域的芯片密度为 1037点 ／cm ，每张芯片可进行两次杂交。用 3个茶多酚含量有差异的品种 芯片 进行 了杂交 ，获得了不同品种的基囚表达谱及表达差异 的基囚；选取其中2个与茶叶香气密切相关的基囚，采 用荧光定量PCR的方法进行了验证 ，基因表达变化趋势与芯片检测结果一致 ，验证了cDNA芯片杂交结果的可 靠性。该芯片可以进一步应用于许多茶学研究领域，进行基因表达差异的高通量检测 。 关键词：茶树；eDNA芯片；基因表达谱；定量 PCR 中图分类号：$571．1；Q523 文献标识码 ：A 文章编号：1000．369X (2006)03．166．05 DevelopmentandPreliminaryApplicationofeDNA MicroarrayofTeaPlant(Camelliasinensis) ZHAOLi—ping，GAOQi—kang，CHENLiang木，WANGXin—chao，YAOMing—zhe (1LabforTeaGermplasm，GeneticImprovementandMolecularBiology，TeaResearchInstituteChineseAcademyofAgricultural Sciences；KeyLaboratoryofTeaChem icalEngineering，theM inistry ofAgriculture，Hangzhou310008，China；2Biological MacromolecularResearchLaboratoryofAnalyzingandMeasurementCenter，ZhejiangUniversity，Hangzhou310029，China) Abstract：Totally，1680genesobtainedinourESTprojectwereselectedfromtheeDNAlibraryofcloneLongjing 43 to develop thefirsteDNA microarray ofteaplant．Each genein the microarray wasduplicated．The eDNA microarraycontains6912dots，including6720EST，160positivecontrolsand32negativecontrols．Onemicroarray wasspottedtworegionswith4~4matrixesanditcouldbehybridizedtwice．Thedensityofthemicroarraywas1037 dotspercm ．Three tea cloneswith differentcontentsoftea polyphenolwereselected to conducttwo setsof hybridizationexperimentswiththemicroarrayandthedifferentlyexpressedESTswerefound．Then，twogenesthat wereclosely related to tea aromawereselectedforreal-timePCR analysisto validate the microarray data and validatedthereliabi