耐促溶剂雷斯青霉菌株N注入诱变选育-同济大学学报.PDF

第 30 卷 第 2 期 辐 射 研 究 与 辐 射 工 艺 学 报 Vol.30, No.2 2012 年 4 月 J. Radiat. Res. Radiat. Process. April 2012 耐促溶剂雷斯青霉菌株 N + 注入诱变选育 刘 莎 毛淑红 胡晓杰 周 瑶 路福平 （天津科技大学生物工程学院 天津 300457 ） 摘要 在甾体生物催化过程中，向发酵液中添加亲水性有机溶剂，是增加底物溶解进而提高转化效率的有效 手段，但有机溶剂对于菌体普遍具有毒性。为此采用 N+注入诱变方法，对出发菌株雷斯青霉 p-10-8 进行改良， 获得耐促溶剂菌株 60 A-5-8 ，当投料量增大到 4‰ 时转化率达 82.61%。经过 5 次传代实验证明，该菌株具有 较高的遗传稳定性。 关键词 生物催化，雷斯青霉，离子注入 中图分类号 Q81 ，Q93，S603，Q68 孕二烯酮（化学名：18,19-二去甲基孕甾-4,15- 生物已成为该方向上的研究热点。采用低能重 N+ 二烯-13- 乙基-17β-羟基-3-羰基-20-炔）是迄今为止 注入诱变方法筛选耐促溶剂的菌株，以达到提高底 孕激素活性最强的甾体激素药物，因其具有口服吸 物投料量进而提高转化效率的目的。 收快速完全、副作用小等优势成为目前最为理想的 N+注入是一种新的诱变方法，它不仅可以影响 口服避孕药。15α-羟基左旋乙基甾烯双酮是孕二烯 细胞的生理生化功能还能引起细胞中遗传物质的改 酮重要中间体, 目前主要通过化学合成获得，因反 变，具有突变率高和突变谱广等特点[9-12] + 。N 注入 应效率低，不但其成本昂贵，且对环境污染严重。 诱变育种是集化学诱变、物理诱变为一体的综合诱 因此，人们开始研究应用生物催化方法生产 15α-羟 变方法。它能够引起染色体的畸变，导致 DNA 碱 基左旋乙基甾烯双酮。生物催化方法是利用生物催 基的损伤、断裂，从而使遗传物质在基因水平或分 化剂（主要是酶或微生物）来改变（通常是加快） 子水平上发生改变或缺失，大幅度提高变异频率。 化学反应速度。所用生物催化剂主要包括雷斯青霉 目前工业进行甾体生物催化的微生物大多是霉菌， [1,2]、雪腐廉刀菌 （Fusarium （Penicillium raistrickii ） + 而近几年利用 N 注入育种获得霉菌高产菌株，成果 [3]等完整细胞。但是，由于目前该工艺存在 nivale ） 显著，正突变率高、生产水平提高幅度大[13] 。如杨 着转化率低及能耗高等问题，例如，当以 3 g/L 的 英歌等 [13] 在研究 L(+) －乳酸生产菌( 米根霉 左旋乙基甾烯双酮为底物时，通过雷斯青霉进行羟 + 基化，转化率仅为 66.5%[4]，所以，一直未实现工 Rhizopus oryzae ; RLC41-6)诱变过程中，发现 N 注 业化生产。 入米根霉可获得较 X 射线、γ射线及化学诱变剂等 更高的正突变率和更大的变异幅