蚊媒标本采集.DOCVIP

PAGE \* MERGEFORMAT PAGE \* MERGEFORMAT - 20 - PAGE \* MERGEFORMAT PAGE \* MERGEFORMAT 4 附件1 寨卡病毒实验室检测技术方案 寨卡病毒(Zika Virus)属黄病毒科（Flaviviridae）黄病毒属（Flavivirus），呈球形，直径约为40-70nm，有包膜。基因组为单股正链RNA，长度约为10.8Kb，可分为亚洲型和非洲型两个基因型。 寨卡病毒病的检测方法包括病毒核酸检测、IgM抗体检测、中和抗体检测和病毒分离等。寨卡病毒与黄病毒属其他病毒具有较强的血清学交叉反应，目前主要采用病毒核酸检测。 一、检测对象 （一）疑似和临床诊断病例。 （二）伊蚊成蚊和幼虫。 二、样本采集、保存和运输 （一）病例标本采集。 对怀疑感染寨卡病毒的患者，推荐采集血清标本开展检测。 用无菌真空干燥管，采集患者非抗凝血5mL，及时分离血清，分装2管，保存于带螺旋盖、内有垫圈的冻存管内，标记清楚后低温保存，其中1管用于现场实验室检测，1管用于上级疾病预防控制机构复核。 对病例应尽可能采集双份血液标本，两份标本之间相隔14天为宜，住院病例可于入院当天和出院前1天各采集一份。 （二）蚊媒标本采集。 疫点内采集的伊蚊成蚊及幼虫，分类鉴定后，填写媒介标本采集信息表，按照采集地点分装，每管10-20只。 （三）标本保存、运送。 如标本能够在24小时内开展实验室检测，应将标本置于2-8℃保存；如能在7天内开展检测，应将样本置于-20℃保存；如需保存7天以上，应将样本置于-70℃以下。 标本运送时采用低温冷藏运输，避免冻融，样本运输应遵守国家关于三类病原体的相关生物安全规定。 三、检测方法 寨卡病毒病的检测方法包括病毒核酸检测、IgM抗体检测、中和抗体检测和病毒分离等。寨卡病毒与黄病毒属其他病毒具有较强的血清学交叉反应，目前主要采用病毒核酸检测。 开展蚊媒寨卡病毒检测时，对捕获的伊蚊成蚊或幼虫进行病毒核酸检测。 开展寨卡病毒实验室检测时，应同时考虑登革病毒和基孔肯雅病毒感染可能。登革病毒和基孔肯雅病毒实验室检测应按照相应的技术指南开展。 （一）临床标本检测。 1．病原学检测 病原学检测主要适用于急性期血液标本，一般认为发病7天内检测阳性率高。 （1）核酸检测：采用荧光定量RT-PCR方法，是目前早期诊断寨卡病毒病的主要检测手段。 （2）病毒分离：将标本接种于蚊源细胞（C6/36）或哺乳动物细胞（BHK21、Vero）进行分离培养，出现病变以后，用检测核酸的方法鉴定病毒。也可使用乳鼠脑内接种进行病毒分离。 2．血清学检测 （1）血清特异性IgM抗体：发病3天后可检出病毒特异性IgM抗体，但发病7天后检出率高。可采用ELISA、免疫荧光等方法检测。IgM抗体阳性，提示患者可能新近感染寨卡病毒，但寨卡病毒IgM抗体与登革病毒、黄热病毒和西尼罗病毒等黄病毒有较强的交叉反应，易于产生假阳性。 （2）中和抗体：采用空斑减少中和试验方法检测。患者恢复期血清中和抗体阳转或滴度较急性期呈4倍及以上升高，且排除登革、乙脑等其他常见黄病毒感染，可以确诊。 （二）媒介标本检测。 1．标本处理 将分类后的伊蚊成蚊或幼虫，按照采集地点，每10～20只为一份进行研磨处理。 2．病毒核酸检测 用RT-PCR的方法进行寨卡病毒核酸检测 3．病毒分离 病毒核酸阳性的标本进行病毒分离。 四、生物安全 寨卡病毒在我国归属于三类病原体，应在生物安全二级实验室（BSL-2）开展实验室检测。应按照《病原微生物实验室生物安全管理条例》等相关规定要求，做好生物安全防护工作。