幽门螺杆菌感染端粒酶表达和胃癌相关性分析.docVIP

幽门螺杆菌感染端粒酶表达和胃癌相关性分析 　　[摘要] 目的：探讨幽门螺杆菌(Hp)感染与端粒酶表达在胃癌发生、发展过程中的关系及临床意义。方法：应用端粒酶反复扩增法(TRAP)进行端粒酶活性检测。应用快速尿素酶试验和病理组织学Giemsa染色法检测Hp，两种方法均阳性即可诊断Hp感染。结果：胃癌组织、萎缩性胃炎、浅表性胃炎中，Hp感染阳性率分别为66.6%、43.3%、35.0%，差异无显著性(P0.05)；而端粒酶表达阳性率分别为89.5%、36.6%、10.0%，差异有显著性(P0.05)；浅表性胃炎组OR=0，差异有显著性(P0.05)。结论：Hp与端粒酶阳性检出率随病变加重而增加，Hp感染在诱导端粒酶活性、导致癌变中可能起着重要作用。 　　[关键词] 幽门螺杆菌；端粒酶；胃癌 　　[中图分类号] R735.2[文献标识码]Ａ [文章编号]1673-7210（2009）01（c）-027－02 　　 　　大量的流行病学和病理组织学资料表明，幽门螺杆菌(Hp)感染在胃癌的形成过程中具有重要作用。以往的研究证明，Hp感染促进胃黏膜上皮细胞增生，但对其促进胞增殖机制的阐明尚在研究之中[1]。近年来国内外有资料[2-3]表明恶性肿瘤细胞端粒酶活性阳性率为85%～90%，这说明端粒酶激活与恶性肿瘤发生也密切相关。为了进一步探讨Hp感染、端粒酶活性与胃黏膜病变的相关性，我们检测了人胃癌、萎缩性胃炎及浅表性胃炎胃黏膜标本端粒酶活性，并对酶活性及粘膜病变与Hp感染的相关性进行了分析。 　　1材料与方法 　　1.1组织标本 　　232例标本分别取自我院胃癌、萎缩性胃炎及浅表性胃炎患者，所有病例均经病理组织学证实。胃癌132例按日本胃癌分类标准：早期胃癌8例，中晚期胃癌124例；有淋巴结转移44例，脏器转移20例；男112例，女20例，平均年龄57.2岁。萎缩性胃炎60例，男34例，女26例，平均年龄57岁。浅表性胃炎40例，男4例，女36例，平均年龄34.2岁。胃癌组内镜或手术取癌组织8～10块。萎缩性胃炎组及浅表性胃炎取胃窦大、小弯各3块，以上标本分别作端粒酶活性、病理组织学及Hp检测。端粒酶标本置无菌试管中，-80℃冻存。三组的年龄、性别等临床资料均无明显差异。 　　1.2组织提取物的制备 　　冰冻组织块50～100 mg液氮研磨，用冰缓冲液[10 mmol/L N-双(2-羟乙基)哌嗪-N′2-(乙磺酸)-KOH(pH 8.0)，1.5 mmol/L MgCl2，10 mmol/L KCL，1 mmol/L二硫苏糖醇]清洗后，加100 μl裂解液[10 mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(pH 7.5)，1 mmol/L MgCl2，1 mmol/L乙二醇-双-(2-氨乙基)四乙酸，5 mmol/Lβ-巯基乙醇，0.5% 32-(3-胆胺丙基)二甲基氨-1-丙烷磺酸酯，10%甘油]，0℃放置30 min，13 500 rpm 4℃离心30 min收集上清，用Folin-酚法测定蛋白浓度，其余上清分装，-80℃保存待测。 　　1.3端粒酶活性检测 　　应用TRAP法进行端粒酶检测，取5 μg蛋白含量的提取液，加入反应液[20 mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(pH 8.3)，1.5 mmol/L MgCl2，1 mmol/L乙二醇-双-(2-氨乙基)四乙酸，0.005%吐温-20，50 μmol/L三磷酸脱氧核糖核酸，1 μg T4基因32蛋白，0.2 μg TS引物(5′-AATCCGTC-GAGCAGAGTT-3′)]混匀后20℃保温30 min完成端粒酶介导的延伸反应，90℃ 3 min终止反应后，加入cx引物(5′-CCCTTACCCTTACCCTT-ACCCTTA-3′)和2 U Taq酶，混匀后覆盖液体石蜡进行PCR扩增[2]。循环参数为94℃ 45 s，50℃ 45 s，72℃ 60 s，循环35次；最后72℃延伸5 min。以已知端粒酶阳性的组织作为阳性对照，以裂解液作为阴性对照。取12 μl PCR产物进行12%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，银染显色，干胶器干胶后保存。 　　1.4 Hp检测 　　Hp检测应用快速尿素酶试验和病理组织学Giemsa染色法，以上两项均为阳性定为Hp感染。 　　1.5统计学分析 　　采用χ2检验。 　　2结果 　　2.1不同胃黏膜标本Hp感染及端粒酶活性检测 　　40例浅表性胃炎，60例萎缩性胃炎及132例胃癌标本的Hp感染检测结果显示，其阳性率分别为35.0%、43.3%及66.6%，差异无显著性(P0.05)。相应组织的端粒酶活性检出率分别为10.0%、36.6%及89.5%，差异有显著性(P0.05)。 　　2.2不同黏膜标本端粒酶活性与Hp