RNAi导致基因沉默的机制和应用进展.pdfVIP

·60 · 遗传繁育 中国畜牧兽医 　2007 年第 34 卷第 3 期 RNAi 导致基因沉默的机制和应用进展 向会耀 ,郝葆青 ,谭玉梅 ,秦天英 ,宋慧 (西南民族大学生命科学院 ,成都 　6 1004 1) 摘要 :RNAi 主要通过双链 RN A (dsRN A) 被核酸酶切割成 2 1～23 nt 的干涉性小的 RN A ,即 siRN A , 由 siRN A 介导识别 并靶向切割同源性靶 mRN A 分子而实现的;RN Ai 需要多种蛋白质因子以及 A TP 参与 ,而且具有生物催化反应特征 ; RN Ai 具有高效性和高度特异性 ,作为一种关闭特定基因的新技术 ,为基因功能研究提供了一个快速 、简便的方法 ,在后基因组时代 应用前景广阔。 关键词 :RN Ai ;双链 RN A ;基因沉默 中图分类号 :Q756 　　　　　文献标识码 :A 　　　　　文章编号 :167 17236 (2007) 　　RN Ai ( RN A int erference) 是近年发展起来的 2002) 。 新兴基因阻断技术 ,它是一种双链 RN A ( d sRN A ) 　　1988 年后 , 华盛顿卡耐基研究院的 A ndrew 分子在 m RN A 水平关闭相应序列基因的表达或使 Fire 和马萨诸塞大学癌症中心的 CraigMello 首次 其沉默的过程 , 即序列特异性的转录后基因沉默 ( 将双链 RN A正义链和反义链的混合物注入线虫体 P T GS ) , RN Ai 即指通过反义 RN A 与正链 RN A 内,结果诱发了基因沉默 。RN Ai 潜在的作用促使 形成双链 RN A 特异性地抑制靶基因的现象 ,它通 Fire 和 Timmon s 继续试验 , 将一种能够表达与 C 过人为地引入与内源靶基因具有相同序列的双链 legan sunc222 基因同源的双链 RN A 的基因工程细 RN A (有义 RN A 和反义 RN A) ,从而诱导内源靶基 菌喂食线虫 ,结果线虫表现出类似 unc222 缺陷的 ( 因的 mRN A 降解 ,达到阻止基因表达的目的 Firea 表型 。后继的试验结果表明将线虫浸入双链 RN A 等 ,1998 ,1999) 。主要分 2 个步骤 : ①启始阶段 , 即 中同样可以诱导基因沉默 ———这种技术使得大规模 内源或外源 dsRN A 经特定的酶切割产生 2 1～23 nt 筛选线虫 RN Ai 诱导的功能缺失突变体成为可能 , 的 siRN A ; ②效应阶段 , 即 si RN A 与 RN A 诱导沉 并引发后继的大量针对这种模式生物基因敲除的 默复合物 R ISC ( RN Ainduced silencin g co mp lex ) 研究 。 结合共同降解靶 mRN A 。 RN Ai 可能是生物体中存在的一种普遍现象 , d sRN A 有 2 类 : si RN A 和 mi RN A 。si RN A 是 代表了一个古老的细胞反应通路 。因此 RN Ai 有望 短的双链 RN A ;miRN A 是位于茎环结构茎上的一 成为今后分析基因功能的有力工具 ,并可能用于基 段序列 。mi RN A 同有活性的 si RN A 生化活性相 因的特异治疗 。人们在进一步的研究中 ,相继在植 同。通常 mi RN A 被加工成类似 si RN A 的结构后 ( ) 物 Wat er hou se 等 ,1998 、真菌 、线虫 、果蝇 、水螅和 引发 RN Ai (N at t y ,2003) , si RN A