热休克蛋白70可增进融合在PTD-Jdomain上之NDV-中国畜牧学会.PDFVIP

中國畜牧學會會誌，41(4) ：287~302, 2012 熱休克蛋白 70可增進融合在 PTD-J domain 上之NDV HN 抗原基的免疫原性 (1) (1) (1) (1)(2) 林岱昀 蘇郁琇 鍾玉東 莊景凱 摘要：本文主要之目的在於以新城病病毒（NDV ）之HN 蛋白質為實驗模式， 釐清PTD-J-domain 增強與其融合之蛋白質誘發體免疫反應的機制。由於Hsp40 可藉由其J-domain 與Hsp70 （特指誘發型Hsp72 ）的Nucleotide Binding Domain （NBD ）作特異性的結合，且細胞外Hsp70 又可以經TLR2 和TLR4 激活免疫 反應。因此，我們測試Hsp70 在PTD-J-X 免疫系統上是否可以扮演佐劑的角色。 截取NDV HN 蛋白質片段並藉軟體預測同時具Th 抗原基與B 抗原基特性，兩 片段AA124-166 及AA273-315 被找到，以FFRK 四胜肽連結組合成NDVepi 。 合成之NDVepi cDNA 以EcoRI/Xho I 切位選殖到pET22b-PTD J 表現載體後， 1 1 可表現PTD-J-NDVepi 重組蛋白質。以PTD-J-NDVepi/Hsp70 混合物施打BALB/c 小鼠，boost 1 即可得到高活性針對NDVepi 之抗體；而以PTD-J-NDVepi 施打 BALB/c 小鼠，則需要到boost 3 才可得到高活性針對NDVepi 之抗體。再次證 實Hsp70 可在PTD-J-NDVepi 免疫系統上扮演佐劑的角色。兩種免疫方法得到 之抗體皆能辨識全長之NDV HN 重組蛋白質。免疫螢光分析之結果顯示，單以 PTD-J-NDVepi 免疫所誘發的血清僅得到微弱的訊號；但以PTD-J-NDVepi/Hsp70 混合物免疫所誘發的血清則可得到和正控制組M2 anti-Flag2 相當之訊號。此結 果顯示，Hsp70 可以幫助PTD-J-NDVepi 誘發可辨識folded form 之NDV HN 。 （關鍵語：體免疫、新城病病毒、次單位疫苗） 緒 言 一、新城病病毒 新城病由新城病病毒（Newcastle disease virus, NDV ）所引起，NDV 屬於Mononegavirales 目， Paramyxoviridae 科，Paramyxovirinae 亞科，Avulavirus 屬。NDV 含有一條負股、全長約 15,186 個 核苷酸之RNA 基因體，共記錄了六個基因（參見圖一），依序為：核蛋白（NP ）、磷蛋白（P ）、基 質（M ）、融合蛋白（F ）、血球凝集素-神經胺酸酶（HN ）和RNA 聚合酶大分子次單元 (L ）。因 RNA editing ，P 基因可另外再產生V 和W 兩種蛋白質。病毒在宿主細胞之細胞質複製，為具封膜 （envelope ）病毒。F 和HN 為主要之膜醣蛋白質、M 則位於膜下方、NP 和RNA 形成錯合物、P ______________________________________________________________________ (1) 台灣動物科技研究所生物科技組，350 苗栗縣竹南鎮頂埔里科東二路52 號。 (2) 通訊作者，E-mail: jkjuang@mail.atit.org.tw 288 中國畜牧學會會誌 第41 卷 第4 期 和 L 為 RNA-dependent RNA polymerase （RdRP ）之兩個次單元。Avulavirus 屬涵蓋 10 種 avian paramyxovirus ，分別為Avian Paramyxovirus type 1 （APMV-1 ）、APMV-2