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利用体细胞核移植技术生产黄牛和水牛同种异种转基因克隆囊胚
18 8 2008 8 857
＊学术论文 ＊
利用体细胞核移植技术生产黄牛和水牛同种、
异种转基因克隆囊胚＊
1, 2 1 1 1 1 1 ＊＊
韦精卫 孟凡丽 韦英明 杨素芳 陆凤花 石德顺
1., 530005;2., 518036
摘要 以含neo 和G P 基因双标记的水牛、 黄牛胎儿 纤维细胞进行牛转基因体细胞核移植,
结果发现:阿菲迪霉素可有效将胎儿 纤维细胞同步于G0/G1 期;以G P 阳性细胞进行核移植,
其卵裂率、 囊胚率与对照组间无显著差异(P0.05), 所构建的重组胚, 2-细胞阶段观察不到G P
的表达, 4-细胞以后G P 的表达逐渐增强, 在囊胚的内细胞团和滋养层细胞均可检测到G P 的表
达, 将黄牛同种转基因克隆囊胚进行移植, 获得1 例妊娠;黄牛卵母细胞 一水牛供核细胞构建异
种重组胚囊胚率显著高于黄牛供核细胞 一水牛卵母细胞构建的异种重组胚(P0.05), 并且异种核
移植重组胚中可检测到G P 表达, G P 可作为异种核移植胚胎来源的一种新标记.
键词 (GFP)
“” , .
[1] [2—4] [5, 6] [7] [8]
, , ,
1 实验材料与试剂的准备
,
, . TCM199 Gibco ,
, Sigma .B
, .1997 Schnieke (DMSO ),
[9]
IX , 1998 Cibelli , DMSO 0.1%.
[10]
neomycin ;2001 (CM )TCM 199
[11]
Keefer G P ;2006 , (M ):TCM 199 +
Lai “omega-3” 26.2mmol/L NaHCO3 +5 mmol/L Hepes+5%
[12]
., (OCS)+2%+0.1μg/mL SH,
, (CM )TCM 199 3%OCS,
[13]
, , (MM ):TCM199+6mmol/L NaHCO3 +
.neo G P 5 mmol/L Hepes+5%OCS,
, 60μg/mL100μg/mL , 1mol/L
、 , NaOH pH 7.4, 0.22 μm
2007-12-10 , 2008-01-28
＊ “” (2007AA 100505)、 (0640008)(DD150034)
＊＊, E-mail:ardsshi@;w eijw99@
858 18 8 2008 8
. , ,
(LipofectaminTM 2000)Invitro- 1.1.1, 1.1.2, 1.1.3.
gen ;pEG P
1.2 受体卵母细胞的准备
;D-MEM/ -12 Gibco ;
、 ,
(BS)Hyclone ;G418 promega.
25—30 ℃PBS 4 h
1.1 供体细胞的准备 ., 10 mL 12
2—6 mm ,
1.1.1 牛胎儿成纤维细胞的培养 3—5
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