DNA环介导恒温扩增技术速检测结核分枝杆菌的研究.docVIP

DNA环介导恒温扩增技术速检测结核分枝杆菌的研究 现代食品科技ModernFoodScienceandTechnology2008,Vo1.24,No.8 DNA环介导恒温扩增技术速检测结核分枝杆菌的研究 黄帆,李琳,林世平,梅国华,山崎伸二,石磊 (1.华南理工大学轻工与食品学院,广东广州510640)(2.深圳市慢性病防治院,广东深圳5108020) 摘要:DNA环介导等恒扩增(1oop—mediatedisothermalamplification,LAMP)技术是一种特异,灵敏,快速的新型基因检测技术, 其检测结果可以通过加入核酸燃料SYBRGreenI进行肉眼观察,也可以通过琼脂糖凝胶电泳进行观察.本文以结核分支杆菌(M.TB) 作为研究对象,设计了4种LAMP引物以特异地识别结核分支杆菌中gyrB基因的六个特殊区域,着重于利用LAMP技术在几种常 见的致病分支杆菌中能快速,特异地检测出结核分支杆菌.实验结果表明,LAMP技术能在恒温(63℃)条件下,lh内检测出结核 分枝杆菌,分别对7株非结核分枝杆菌进行检测,只有—株偶发分支杆菌得到了阳性的结果.说明该技术有望应用于畜牧业中肉制品 或乳制品中结核分支杆菌的检测. 关键词:环介导等温扩增技术(LAMP); 中图分类号:TS207.3;文献标识码:A; 结核分枝杆菌;检测 文章篇号:1673—9078(2008)08—0835—04 ApplicationofLoop—MediatedIsothermalAmplification(LAMP)inRapid Detecti0nofMycobacteriumTuberculosis HUANGFan,LILin,LINShiping2 , MEIGuohua2 ,ShinjiYamasaki,SⅢLei (1CollegeofLightIndustryandFoodScience,SouthChinaUniversityofTechnology,Guangzhou510640,China) (2ShenzhenChronicdiseasehospita1Shenzhen5108020China) Abstract:Loop—me~atedisothermalamplification(LAMP)methodisanovelgenedetectiontechniquewithspecificity,sensitiveand rapidity,theproductsofwhichCallbevisuallyinspectedbyaddingnucleicaciddye(SYBRGreenI),orelectrophoresedin2%agarosegels.In thispaper,theapplicationofLAMPintherapiddetectionofMycobacteriumTuberculosiswasresearched.AsetoffourLAMPprimerswere designedforrecognizingsixdistinctmgionsonthetargetDNA(gyrB).TheresultsshowedthatMycobacteriumTuberculosiswasrapidlyand specificallydetectedbyLAMPmethodamongseveralcommonisolateswithin1hatconstanttemperatureof63℃.Thespecificityofthe methodWasvalidatedon7strainsofnontuberculosismycobacterialwithonlyonesl~Jnshowingpositiveresult.SotheLAMPmethodwillbe usedfordetectionofMycobacteriumTuberculosisinmeatormilkproductsinanimalhusbandryforfoodsafety. Keywords:LAMP;MycobacteriumTuberculosis;detection 世界卫生组织估计全球大约有1/3的人口感染了 结核病,而且据估算2000年全世界就有80至90万个 结核病病例,其中死亡病例大概有30万个.在全球性 传染病中,结核病已经成为仅次于艾滋病的第二大致 死疾病.该传染病多发生于人民收入较低的发展中国 家,中国是其中一个患病率较高的发展中亚洲国家[1]o 结核病是一种由结核分支杆菌引起的人畜共患的慢性 传染病,结核分枝杆菌可以分为三型,即牛型,人型 及禽型,主要包括由人结核分枝杆菌,牛分支杆菌, 收稿日期:2o08_05—