微生物尿酸氧化酶的筛选酶学性质及重组表达-微生物学报.PDF

生 物 工 程 学 报 咸静女 等/微生物尿酸氧化酶的筛选、酶学性质及重组表达 1147 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn Jul. 25, 2018, 34(7): 1147−1155 DOI: 10.13345/j.cjb.170524 ©2018 Chin J Biotech, All rights reserved ·研究报告· 咸静女，郭鑫，李波，彭海波，汪小龙，张建业，陈刚 中国海洋大学，山东 青岛 266007 咸静女, 郭鑫, 李波, 等. 微生物尿酸氧化酶的筛选、酶学性质及重组表达. 生物工程学报, 2018, 34(7): 1147–1155. Xian JN, Guo X, Li B, et al. Screening, characterization and expression of microbial urate oxidase. Chin J Biotech, 2018, 34(7): 1147–1155. 摘 要: 尿酸氧化酶 (Urate oxidase ，Uox) 是一种催化尿酸氧化为尿囊素的酶，常用于尿酸的检测以及痛风和高 尿酸血症治疗。文中从土壤中筛选出一株Uox 高产菌株OUC-1 ，经16S rRNA 部分基因序列分析，与苛求芽孢杆 菌Bacillus fastidiosus 序列相似度达 99% 。B. fastidiosus OUC-1 的Uox 经纯化后，分析表明该酶反应最适pH 和 温度分别为 10.0 和40 ℃；Uox 以尿酸为底物反应动力学参数Km 值为 (0.15±0.04) mmol/L (n=5) 。Mg2+ 能够提高 该酶性活性，而Zn2+和 SDS 能强烈抑制该酶的酶活。参考GenBank 中苛求芽孢杆菌基因组中的uox 基因序列， 成功扩增出uox 基因，通过 SWISS-MODEL 对 Uox 空间结构进行预测，推测该酶是同源四聚体，单亚基分子量 为35.38 kDa 。文中将uox 基因克隆并在大肠杆菌中表达，为后续的Uox 的性能改造提供条件和技术支持。 : 尿酸氧化酶，苛求芽孢杆菌OUC-1 ，酶学性质，重组尿酸氧化酶 Screening, characterization and expression of microbial urate oxidase Jingnü Xian, Xin Guo, Bo Li, Haibo Peng, Xiaolong Wang, Jianye Zhang, and Gang Chen Ocean University of China, Qingdao 266007, Shandong, China Abstract: Urate oxidase (Uox), an enzyme catalyzing oxidation of uric acid to allantoin, is widely used as diagnostic reagents and for treatments of uarthritis and hyperuricemia diseases. In our study, a higher Uox producer, bacterial strain OUC-1, was isolated from soil samples. The 16S rRNA gene sequence of strain OUC-1 showed 99% identity to the homologous fragments of Bacillus fa