通心络干预的心肌微血管内皮细胞条件培养液对大鼠-中国循环杂志.PDFVIP

中国循环杂志 2018 年 3 月 第 33 卷 第 3 期（总第 237 期）Chinese Circulation Journal，March，2018，Vol. 33 No.3（Serial No.237） 279 基础与实验研究 通心络干预的心肌微血管内皮细胞条件培养液对大鼠心肌细胞凋亡的 影响 位庚，梁俊清，姚兵，郭志方 摘要 目的：探讨受损的心肌微血管内皮细胞对大鼠心肌细胞凋亡的影响及通心络的干预作用。 方法：制备 3 种心肌微血管内皮细胞条件培养液：正常心肌微血管内皮细胞（RCMECs）条件培养液，同型半胱氨 酸（Hcy）诱导损伤的 RCMECs 条件培养液和通心络干预的 RCMECs 条件培养液。将大鼠胚胎 H9c2 心肌细胞分为 4 组： （1）正常对照组：弃去原培养基，换为无血清细胞培养基（DMEM）；（2）N-CM 组：弃去原培养基，换为正常 RCMECs 条件培养液；（3）H-CM 组：弃去原培养基，换为 Hcy 诱导损伤的 RCMECs 条件培养液；（4）T-CM 组：弃去原培养 基，换为通心络干预的 RCMECs 条件培养液。JC-1 试剂检测细胞线粒体膜电位（MMP）；流式细胞仪检测细胞活性 氧簇（ROS）水平；活细胞成像系统动态观察各组心肌细胞凋亡情况；蛋白免疫印迹（Western blot）法检测细胞色素 -C （Cyt-C）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 -3（Caspase-3）、B 细胞白血病淋巴瘤 -2 相关 x 蛋白（Bax）和 B 细胞白血病 / 淋 巴瘤 2（Bcl-2）蛋白表达。 结果：与正常对照组的心肌细胞比较，N-CM 组心肌细胞 MMP、ROS、Cyt-C 蛋白表达及凋亡无明显变化（P0.05）； 与 N-CM 组比较，H-CM 组心肌细胞 MMP 降低，ROS 生成增加，凋亡增加，Cyt-C、Caspase-3 和 Bax 蛋白表达上调 （ P 均 0.01），Bcl-2 蛋白表达下调（P0.01）；与 H-CM 组比较，T-CM 组细胞 MMP 升高，ROS 生成减少，凋亡减少， Cyt-C、Caspase-3 和 Bax 蛋白表达下调（P0.05，P0.01），Bcl-2 蛋白表达上调（P0.01）。 结论：损伤的心肌微血管内皮细胞条件培养液可诱导心肌细胞凋亡，通心络可抑制该过程。 关键词 通心络；内皮细胞；肌细胞，心脏；细胞凋亡 Effect of Tongxinluo Treated Conditioned Medium of Cardiac Microvascular Endothelial Cells on Rats’ Embryo Cardiomyocyte Apoptosis WEI Geng, LIANG Jun-qing, YAO Bing, GUO Zhi-fang. Department of Endocrine, The Second Hospital of Shijiazhuang, Shijiazhuang (050000), Hebei, China Corresponding Author: LIANG Jun-qing, Email: liangjunqing@yiling.cn Abstract Objective: To explore the effect of impaired cardiac microvascular endothelial cells on rat’s embryo cardiomyocyte apoptosis and the impact of Tongxinluo in such process. Methods: 3 kinds conditioned medium of cardiac microvascular endothelial cells were prepared. ① normal rat’s cardiac microvascular endothelial cell (RCMECs) conditioned medium, ② homocysteine induced impaired RCMECs conditioned