野生罂粟CORBBE基因片段融合及其RNAi载体构建.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，２９（１１）：４１～４７ 野生罂粟ＣＯＲ、ＢＢＥ基因片段融合 及其ＲＮＡｉ载体构建 １，３ １ ２ １ ２ ２ 梁倩倩 　张金文 　魏玉杰 　王旺田　何庆祥 　雷耀湖 （１甘肃农业大学　兰州　７３００７０　２甘肃农垦农业研究所　武威　７３３００６　３河西学院　张掖　７３４０００） 摘要　可待因酮还原酶（ＣＯＲ）与小檗碱桥酶（ＢＢＥ）是吗啡合成代谢途径的关键酶，其活性大小 直接影响着吗啡合成途径中生物碱的代谢合成。采用ＲＴＰＣＲ从罂粟幼叶克隆出ＣＯＲ和ＢＢＥ基 因全序列，同源性比较结果显示，它们与 ＧｅｎＢａｎｋ上已报道的ＣＯＲ和ＢＢＥ基因高度同源。利用 ｂｌａｓｔ及分子生物学软件ＤＮＡＳｔａｒ对ＣＯＲ和ＢＢＥ基因的ｃＤＮＡ序列同源性进行分析比较，分别从 各基因中筛选和克隆了一段同源性极低、约４００～５００ｂｐ的片段；并应用重叠ＰＣＲ法将其拼接成 ７４４ｂｐ的融合基因ＢＣ，以中间载体 ｐＨＡＮＮＩＢＡＬ和植物表达载