目的与要求掌握owry氏法测定蛋白质含量的原理及方法；.ppt

* * 目的与要求： 掌握Lowry氏法测定蛋白质含量的原理及方法； 掌握分光光度法 实验原理： 在碱性条件下蛋白质的肽键与Cu2+螯合，形成蛋白质-铜复合物。（双缩脲反应 Biuret Reaction） 蛋白质分子中带有酚基的酪氨酸极易使酚试剂中的磷钼酸-磷钨酸还原，生成钼蓝-钨蓝蓝色化合物，蓝色深浅与蛋白质含量成正比。利用蓝色深浅与蛋白质浓度成正比的关系可绘制标准曲线，测定样品中蛋白质含量。（还原反应） 操作步骤 1.取三支试管分两组，按下表操作 试管编号 0 1 2 牛血清白蛋白标准 -- 1.0 -- 蒸馏水(mL) 1.0 -- -- 待测蛋白质溶液(mL) -- -- 1.0 2. 各管加入试剂甲5ml混匀放置10分钟。 3.各管加入试剂乙0.5ml后立即混匀，37℃ 水浴30分钟后用500nm单色光比色测定。 4.计算 样品蛋白质含量（ug/ml） 结果与计算： 根据测定管光密度值计算血清蛋白质含量，C测=A测*C标/C测 注意事项： 各管加酚试剂时必须快速，并立即摇匀，不应出现混浊。 移液管使用前要看清楚刻度和是否写着快、吹，如有则需要用洗耳球吹出剩余液体 进行测定时，加F olin—酚试剂时要特别小心，因为该试剂仅在酸性pH条件下稳定，但上述还原反应只在pH=10的情况下发生，故当Folin一酚试剂加到碱性的铜—蛋白质溶液中时，必须立即混匀，以便在磷钼酸—磷钨酸试剂 被破坏之前，还原反应即能发生。 分光光度计使用前需预热，绝对调零和空白管调节透光度为100%。