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生物电子显微镜技术课程教学和实践 　　摘要：《生物电子显微镜技术》是面向研究生开放的一门实用性强的实验课程。本文从理论授课和实验两方面浅谈生物电子显微镜课程的设置和教学方案。理论授课时采用比较的方法讲授电子显微镜的基础知识，重点突出电子显微镜生物制样技术，跟进电镜领域技术新进展，学生自主学习和理论与实践相结合等教学方案；并设置一半学时为实验课，使学生切实学到电子镜显微镜理论知识和掌握电子显微镜应用技术。 　　关键词：生物；电子显微镜；教学 　　中图分类号：G642.0 文献标志码：A 文章编号：1674-9324（2018）19-0166-02 　　一、引言 　　透射电子显微镜和扫描电子显微镜用于观察样品的超显微形貌，被广泛应用于生物、基础医学、农业、林业、环境和材料等领域，涉及的专业知识主要包括细胞生物学和材料学。近年来，随着国家和各级政府对高校基础研究的投入加大，电子显微镜在各个高校逐渐普及，很多高校和科研院所成立电子显微镜中心，并针对本科生和研究生开设电子显微镜课程[1-4]。作?橐凰?综合性院校，专业多且范围广，应用到电子显微镜的专业包括生物、农学、林学、环境科学、食品、兽医、动物科学和材料等专业。这些专业跨度较大，应根据学生的专业和基础知识在理论授课时对部分内容有所侧重。经过多年的上课经验和电镜中心工作的实践经验，本文从理论和实验两部分浅谈《生物电子显微镜技术》课程教学和实践的几点理解。 　　二、理论课部分 　　1.采用比较的方法讲授电子显微镜基础知识。电子显微镜的结构与原理是电子显微镜课程最基础的知识，它涉及光学、电磁学和机械学等方面的知识，内容相对枯燥且艰深。因此，如何通俗易懂地讲好这部分内容，让学生易于理解是关键。笔者认为可从显微镜的发展历史讲起，从普通的光学显微镜到荧光显微镜和激光共聚焦显微镜，以阿贝公式为基础，强调波长是决定显微镜分辨率的最主要因素。光学显微镜与电子显微镜最大的区别是光源的不同。电子显微镜的光源是电子，其波长远比光学显微镜的光源小，使得其分辨率远高于光学显微镜。而正是由于光源的不同，使得电子显微镜和光学显微镜的镜体结构有着巨大的差别[5]。利用比较分析的方法，由学生相对的熟悉的光学显微镜讲起并作为比较，分析电子显微镜与光学显微镜的主要区别，使学生更容易理解。 　　2.生物样品电镜制样方法是重点内容。生物样品的电镜制样方法是《生物电子显微镜技术》课程最重要的部分，在教学时要重点突出。透射电镜生物样品制样步骤包括取材固定、缓冲液漂洗、脱水、树脂渗透和包埋等步骤，扫描电镜生物样品制样步骤包括取材固定、缓冲液漂洗、脱水、干燥和金属镀膜等步骤。其中第一步取材固定最为关键。要求学生理解戊二醛、多聚甲醛、锇酸和高锰酸钾这几种固定液固定的基本原理。取材时根据样品的材质和实验目的不同而采用不同的固定方法和固定液，比如取脑部神经组织采用灌流固定方法效果较好；免疫金标记宜用多聚甲醛固定，因为戊二醛和锇酸对蛋白的抗原性破坏性极大；有细胞壁的样品固定时需要在戊二醛中加入多聚甲醛。此外，生物电镜制样所用的试剂如戊二醛、多聚甲醛、锇酸、丙酮、环氧树脂等试剂是有毒致癌物，在授课时也需要强调如何安全使用这些试剂以及废弃试剂如何保存和处理。 　　由于本课程面向生物、农学、林学、环境科学、食品、兽医、动物科学和材料等专业学生开放，大部分专业的学生完全没有细胞生物学知识。而生物电镜观察需要学生会认识样品的组织结构和细胞内各种细胞器，如细胞核、线粒体、高尔基体、内质网、叶绿体等重要细胞器。因此，这一部分内容除了要讲授电子显微镜生物制样技术，也需要向学生讲授与电镜相关的细胞生物学知识。可以从电镜中心的客户图片中挑选一些典型动植物细胞图片给学生展示，如模式植物拟南芥和水稻的根、茎、叶的细胞图片，模式动物小鼠各个细胞器如心脏、肝脏、肾脏、大脑和小脑等器官的细胞图片等。同时展示各类细胞器病变的图片作为比较，使学生了解基本的细胞生物学知识，为日后的电镜观察做理论知识储备。 　　3.跟进电子显微镜领域技术新进展。电子显微镜技术发展日新月异，从2013年开始爆发的单颗粒冷冻电镜，近年逐渐热门的高压冷冻制样、聚焦离子束三维重构、断层摄影术、光镜与电镜联用等技术被广泛应用。每一项技术都给生物领域带来深远影响，利用这些新技术得到的研究结果甚至推翻之前的认知。授课时，即使本校还没有购置与新电镜技术相关的电镜设备，也建议向学生讲授新一些电镜技术知识，开拓学生视野，拓宽学生研究思路。 　　4.学生自主学习。《生物电子显微镜技术》是一门应用性强的课程，授课对象是需要用电镜作为研究工具的研究生，学生已经具备一定的研究基础。可以设置一些与电镜相关的主题，如单颗粒冷冻电镜、电子断层摄影术、免疫金标记、电镜与激光共聚焦显微镜联用等主题，这些技术