自然科学08药品微生物限度检测技术.ppt

* 四、控制菌检查－铜绿假单胞菌检查 最终结果判断 增菌培养 供试液的制备 书写检验 记录单 分离纯化 无菌落或无特征菌落 配培养基和稀释液 革兰染色、镜检→ 氧化酶试验 绿脓菌素试验 生化试验 硝酸盐还原试验 42℃生长试验 明胶液化试验 ★铜绿假单胞菌检查流程图 胆盐乳糖培养基 十六烷三甲基溴化铵琼脂 30-35℃ 18~24h 30-35℃ 18~24h 特征菌落 灰白色、扁平、周围有水溶性蓝绿色素 * 十六烷三甲基溴化铵平板 胆盐乳糖培养基 黄绿色菌膜 灰白色湿润 氧化酶试验 粉红/紫红色 * 绿脓菌素试验 盐酸层呈粉紫色氯仿层呈蓝绿色 硝酸盐还原产气试验 N2 明胶液化试验 明胶培养基（高层） 明胶液化 * 二、控制菌检查－铜绿假单胞菌检查 ★铜绿假单胞菌检查结果报告 被检样品经增菌分离培养后，经证实为革兰氏阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌素试验皆为阳性者，即可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌；如绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝酸盐还原产气和42℃生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌。 * 二、控制菌检查－金黄色葡萄球菌检查 ★金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。 * 二、控制菌检查－金黄色葡萄球菌检查 ★金黄色葡萄球菌检查意义 金黄色葡萄球菌在外界分布较广，抵抗力也较强，能引起人体局部化脏性病灶，严重时可导致败血症，因此化妆品中检验金黄色葡萄球菌有重要意义。 * 二、控制菌检查－金黄色葡萄球菌检查 革兰染色、镜检→ 生化试验:血浆凝固酶试验 最终结果判断 增菌培养 供试品的处理 书写检验 记录单 分离纯化 无菌落或无特征菌落 配培养基和稀释液 30-35℃ 30-35℃ 营养肉汤培养基或亚碲酸钠肉汤 18-24h 卵黄氯化钠或甘露醇氯化钠琼脂 24-72h 特征菌落 金黄色、边缘有浑浊带 ★金黄色葡萄球菌检查流程图 * 卵黄氯化钠琼脂 金黄色，有乳浊圈 甘露醇发酵试验 血浆凝固酶试验 血浆凝块 液态血浆 * 二、控制菌检查－金黄色葡萄球菌检查 ★金黄色葡萄球菌检查结果报告 凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经染色镜检，证明为革兰氏阳性葡萄球菌，血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。 * 二、控制菌检查－梭菌检查 增菌培养 供试液的制备 书写检验 记录单 不出现浑浊、产气、 消化碎肉、臭气 配培养基和稀释液 其他 分离纯化 最终结果判断 革兰染色、镜检→ 生化试验：过氧化酶试验 * 二、控制菌检查－白色念珠菌检查 有特征菌落 念珠菌显色培养基 最终结果判断 革兰染色、镜检 芽管试验 增菌培养 供试液的制备 书写检验 记录单 分离纯化 配培养基和稀释液 无菌落或无特征菌落 有特征菌落 1%聚山梨酯80-玉米培养基 * * * * * * Ps: （1）双倍乳糖胆盐培养基中的胆盐具有抑制革兰阳性菌生长的作用；溴甲酚紫﹥6.8呈紫色，﹤5.2呈黄色，大肠埃希菌能分解乳糖成乳酸并产生氢气、甲烷、CO2等气体。 （2）MUG检测：大肠埃希菌含有β－葡萄糖苷酸酶，该酶能分解MUG（4-甲基伞形酮葡萄糖苷酸），在紫外灯下能产生蓝白荧光，该反应专属性好，敏感性强，易于观察，可以不必从混合菌中分离单个菌落，是检查大肠埃希菌的快速方法。同时大肠埃希菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨水培养基中的色氨酸生成吲哚，吲哚能与培养基中的对二甲基苯甲醛反应生成红色玫瑰吲哚。两个试验相结合能提高大肠埃希菌的检出率。 （3）EMB平板含有乳糖、伊红和美蓝，大肠埃希菌能分解乳糖产酸，使伊红和美蓝结合成紫黑色具有金属光泽的络合物。 麦康凯琼脂平板含有乳糖、胆盐和中性红，大肠埃希菌能分解乳糖产酸，使中性红变为桃红色，从而使菌落为桃红色。 （4）IMViC试验 ①I：靛基质试验，见上； ②M：甲基红试验，采用磷酸盐葡萄糖胨水培养基，大肠埃希菌能分解葡萄糖产酸，使溶液的pH降至4.5以下，甲基红（红pH4.4-6.2黄）变色使溶液变成红色；而产气杆菌能是丙酮酸转化为乙酰甲基甲醇，培养液pH大于5.4，溶液为橙黄色。 ③V－P：乙酰甲基甲醇生成试验，将疑似菌落接种与磷酸盐葡萄糖胨水培养基，培养48±2h，取2ml培养液加入ɑ－萘酚乙醇试液1ml，混匀，再加入40%氢氧化钾0.4ml，充分振摇，在4h（通常30min）内出现红色为阳性。产气杆菌能分解1分子葡萄糖产生2分子丙酮酸，2分子丙酮酸缩合，脱酸转变成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境中能被空气中氧气氧化成二乙酰