东方百合“甜梦”花器官组织培养再生植株的研究.docVIP

东方百合“甜梦”花器官组织培养再生植株的研究 　　摘要：研究东方百合“甜梦”品种花器官的组织培养，为“甜梦”百合种球生产产业化提供技术支持。以“甜梦”花器官为外植体诱导愈伤组织，以MS添加不同浓度6-BA为愈伤组织分化培养基，MS添加不同浓度6.BA及NAA配比为诱导叶片产生不定芽的培养基，MS添加不同浓度糖为结鳞茎培养基，进行组织培养。结果表明：花器官不同部位诱导愈伤组织从易到难为：子房花柱花药花托；愈伤组织分化以MS+6.BA 3.0 mg/L培养基较适宜；无菌叶片诱导不定芽以MS+6.BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L培养基为好；添加60 g/L糖的培养基利于不定芽结鳞茎生根；带鳞茎组培苗可直接移栽于大田菜园土。通过“甜梦”花器官的培养，得到可用于生产的组培苗，该技术可应用于“甜梦”百合种苗工厂化生产。 　　关键词：东方百合 “甜梦” 组织培养 花器官培养 　　百合（Lilium spp.）是百合科（Liliaceae）百合属（Lilium）多年生具地下鳞茎的草本植物，具有很高的观赏价值和经济价值。目前鲜花市场上流行的观赏百合有四大品系（铁炮系、亚洲系、东方系、L/A系），东方百合系列种植面积最大。“甜梦”属于东方百合的1个品种，其花色粉红，香气宜人，是近年进口花卉品种之一。百合组织培养中常用的方法是以百合鳞片作为外植体，用0.1%升汞溶液灭菌时间较长，而污染率相对较高。近年来以花器官为外植体进行培养的报道，主要以亚洲百合为主，花器官以花托、子房、花柱的分化率较高，较适宜的培养基是6-BA与NAA的配合使用。其次为东方百合，赵得萍对东方百合Sorbonne花器官进行的培养则花萼、花丝、花瓣均有较高的分化率。刘雅莉以Sorbonne花器官进行培养则直接诱导出不定芽。杨美纯等以“马可波罗”品种花器官为外植体，以花托诱导率为100%最高。王月等采用“梯伯”品种的再生植株嫩叶建立无性体系，张延龙则直接以“西西”品种叶片为外植体诱导愈伤组织，但诱导率不高。试验在前人的研究基础上，以东方百合“甜梦”花器官为外植体，建立其再生植株快速繁育体系，以期为百合的种苗工厂化生产充实理论依据。 　　1.材料与方法 　　1.1试验材料 　　东方百合“甜梦”品种花朵。 　　1.2试验方法 　　1.2.1灭菌及初代培养 　　选取花蕾和半开的花朵作为外植体进行灭菌。在超净工作台上将花蕾用75%酒精擦拭，0.1%HgCl2灭菌5 min；半开的花朵用洗衣粉溶液浸泡5min，自来水冲洗30 min，在超净工作台上用75%酒精灭菌50 s，0.1%HgCl2灭菌5 min，把灭菌过的外植体的花药、花托、柱头、子房等部位切开，分别接种于MS+6.BA 3.0 mg/L的培养基中诱导愈伤组织，6 d后统计污染数和死亡数。 　　1.2.2愈伤组织分化培养 　　把花器官各部分培养所获得的愈伤组织切成直径约0.6 cm的小块，接种于MS添加不同浓度6-BA（0-3.0 mg/L）的分化培养基中。30 d后统计分化出的不定芽数。 　　分化率=分化出不定芽的愈伤组织数/接种愈伤组织总数×100。 　　1.2.3不定芽叶片诱导分化培养 　　把由愈伤组织产生的不定芽叶片切成1 cm长度的小段，接种于培养基上，30 d后统计诱导率。 　　1.2.4不定芽结鳞茎及生根培养 　　选取生长健壮的单株不定芽接种到不同糖浓度的MS培养基中，30 d后统计生根、结鳞茎情况。 　　1.2.5组培苗移栽 　　选取具有根及鳞茎（直径1 cm左右）的组培苗移出培养室，在大棚炼苗3 d后，洗净培养基，分别种在大棚内沙床和室外菜地，每个处理种30株，1个月后统计成活数和新长出的根数。 　　1.3基本培养基及培养条件 　　基本培养基为MS，pH值5.8-6.0。光照强度2000-3000 Lx，光照时间为12-14 h/d，温度为26-28℃。 　　2.结果与分析 　　2.1花器官的培养 　　由表1可看出，经过不同方式的灭菌后，总体污染率大部分为0，只有花蕾有少量的污染。存活的花药培养13 d后开始膨大，之后慢慢变绿。花蕾的花托和子房在培养12 d后开始膨大，15 d后花柱也开始膨大，膨大后的子房颜色变绿。半开花朵的花器官培养中，子房比花蕾的子房推迟2 d膨大，有一端可观察到有5-6粒似胚状体小颗粒，柱头也开始膨大。在培养40 d之后，子房、花柱和花药均诱导出愈伤组织。花器官中以子房的诱导率最高，可达83.3%。 　　2.2 6-BA对愈伤组织分化的影响 　　由花器官诱导得到的愈伤组织经过多代增殖培养后，得到紧致、表面有绿色颗粒状的愈伤组织，接种于添加6-BA的分化培养基中。如表2所示，在6.BA人工激素的刺激下，愈伤组织的分化率最高达1