2,4―D残留免疫学检测的方法的研究进展.docVIP

2,4―D残留免疫学检测的方法的研究进展 　　摘要 概述环境样品、生物样品和各类农作物等样品中2，4-D残留的免疫学检测方法的研究进展，并指出免疫学检测方法在使用中存在的问题和未来的发展趋势。 　　关键词 2，4-D；免疫学检测方法；残留；研究进展 　　中图分类号 S481.8 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）05-0141-02 　　2，4-D又称为2，4-滴、2，4-D酸，化学名为2，4-二氯苯氧乙酸，低浓度的2，4-D常用作植物生长调节剂，主要作用是提高坐果，诱导单性结实，促进果实生长，防止采前落果，高浓度的2，4-D常作为除草剂，还常用作果蔬保鲜剂。2，4-D属于低毒性农药，在自然条件下不易降解，并且水溶性差，吸附性较强，易残留于植物表面[1]，使用不当会造成药害，甚至造成环境污染。2，4-D可在生物体内积累，在较高剂量时具有致畸性，同时它具有潜在的致癌性、致突变性，是一种内分泌干扰物质，对免疫系统和生育系统具有不良影响[2-6]。因此，寻找一种高效、便捷、快速的残留检测方法具有非常重要的意义。 　　我国规定生活饮用水中2，4-D限量为0.03 mg/L[7]，检测方法为GC-ECD法[8]；还制定了食品中2，4-D的限量[9]和GC-ECD和HPLC-MS的检测标准[10-11]。目前，国内外的2，4-D残留检测方法绝大多数为GC-ECD或HPLC-UV检测。GC法不仅需要对样品进行预处理，而且需要衍生化，较为繁琐；HPLC-UV检测成本相对较低，但是对于痕量检测，紫外检测器的定性能力不足，必须消除基质的干扰，其可靠性不如MS检测器。HPLC-MS定性准确，灵敏度好，但设备昂贵，同时必须考虑基质效应对目标分子离子化效率的影响。总之，仪器检测方法不仅仪器昂贵，检测费用高，样品前处理方法繁琐，并且需要专业的技术人员操作，而近些年来新兴起的免疫学分析技术在这方面具有很大的发展前景。 　　1 免疫学检测方法 　　免疫分析法（IA）是利用抗体对目标检测物抗原进行特异性识别的特性，从而达到定性和定量分析的分析技术。 　　1.1 酶联免疫吸附分析法（ELISA） 　　酶联免疫吸附测定是将抗原或抗体吸附在固相载体表面，通过加入酶标抗体或抗原，进行抗原抗体反应，形成酶标免疫复合物，洗涤后，游离的酶标抗体或抗原被洗掉，再加入酶底物与免疫复合物结合显色，进而进行定性或定量测定。 　　于基成等[12]通过活化酯法和混合酸酐法合成2，4-D-BSA和2，4-D-OVA，再分别采用UV法和间接ELISA法进行鉴定。结果是2种方法合成的完全抗原中2，4-D和蛋白质的偶联比分别为24∶1和17∶1，抗血清效价为1.28×104～2.56×104，成功合成了2，4-D 的完全抗原。许 艇等[13]制备了2，4-D特异性多克隆抗体，用间接ELISA法检测抗血清效价和竞争性ELISA法检测2，4-D。结果2，4-D与BSA和OVA的偶联比率分别为32∶1 和18∶1，抗血清效价6.4×105，在优化条件下2，4-D检测限达37 ng/mL。李会娜等[14]也做了相关研究，获得的抗血清效价达1.6×105，2，4-D检测限达50 ng/mL，李会娜等[15]随后又用该方法测定了地下水、蔬菜和原粮等样品中的2，4-D含量。检测样品中的2，4-D含量变异系数15%，样品回收率误差在15%。上述方法抗体对2，4-D的检测灵敏度不高，影响因素可能是抗体对2，4-D与载体蛋白之间的连接键的亲和力强于对2，4-D的亲和力；或2，4-D与载体蛋白偶联过程中改变了2，4-D分子中的电子云排布，出现新的空间构象，从而产生了一些针对这些空间构象特异性抗体。因此，若要提高2，4-D的检测灵敏度，需改变免疫原的合成方法或者制备高特异性的单克隆抗体。王升吉等[16]通过改良EDC法，最终获得的2，4-D类农药多克隆抗体对目标检测物2，4-D、2，4-Dbutyl ester灵敏度与上述方法相比确有提高，抑制中浓度（I50）、检测限（I20）分别为2，4-D 179.80、1.09 ng/mL；2，4-D butyl-ester 3 010.00、1.53 ng/mL。余若祯等[17]制备了小分子环境污染物的多克隆抗体，优化了抗原合成的多种反应条件，得到了多种结合比的2，4-D-BSA完全抗原。首次通过balb/c小鼠的免疫试验评价不同结合比完全抗原的免疫性能。随后余若祯等[18]又采用自行制备的2，4-D单克隆特异性抗体，建立了水中2，4-D的间接竞争ELISA检测方法。采用添加乙醇的反应缓冲体系削弱样品基质效应对检测结果的干扰。但是平行样品测定数据之间的变异系数较大，需要进一步改进检测方法。龚 芳等[19-21]在成功获得了特异性好、