严重烧伤脓毒症患者骨骼肌蛋白降解变化机制的研究.docVIP

严重烧伤脓毒症患者骨骼肌蛋白降解变化机制的研究 　　[摘要] 目的 研究严重烧伤脓毒症患者骨骼肌蛋白降解变化及机制。 方法 2012年1～6月收集严重烧伤伴脓毒症患者8例为脓毒症组。同时选择整形患者10例作为对照。检测对照组及脓毒症组伤后3、5、7、14、21 d血清中肿瘤坏死因子-α、皮质醇、尿液中3-甲基组氨酸的含量，以及股四头肌中泛素基因表达和蛋白表达。 结果 脓毒症组烧伤后3、5、7、14、21 d各指标均显著高于对照组，差异有统计学意义（P 0.01）。脓毒症组皮质醇、TNF-α、3-MH在烧伤后逐渐升高，7 d时达到高峰，后逐渐下降，但在21 d时仍然高于对照组。尿内3-MH的排泄量与血TNF-α和皮质素水平的变化呈正相关，r = 0.89、0.91，P 0.01。脓毒症组股四头肌组织内泛素mRNA、E2-14k mRNA、C2亚基的mRNA、蛋白酶体C2亚基蛋白的表达较对照组均显著增加。 结论 严重烧伤脓毒症患者出现骨骼肌降解，与皮质醇、TNF-α升高有一定的关系。 　　[关键词] 烧伤；脓毒症；骨骼肌；蛋白 　　[中图分类号] R644 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）13-0018-03 　　脓毒症是重症烧伤常见而严重的并发症之一，常常发病急，进展快，并发器官功能衰竭，如果治疗不及时，患者病死率较高[1]。因此，严重烧伤脓毒症的救治一直是国内外烧伤医学界研究的热点、重点和亟待解决的重大疑难问题。烧伤脓毒症时患者骨骼肌蛋白出现高分解代谢，导致负担平衡[2]。目前关于烧伤脓毒症时骨胳肌蛋白高分解代谢的机制尚不完全明了。在脓毒症时，蛋白高分解代谢呈现“强制性”的特点，导致蛋白分解、糖和脂肪的利用率下降，机体负担平衡，营养不良，最终导致多种并发症的发生。骨骼肌约占机体细胞总量的50%，在蛋白分解代谢、负氮平衡中有重要的意义。本文的目的是探讨烧伤脓毒症患者骨骼肌蛋白降解变化及机制，为临床上预防和控制蛋白的高代谢提供理论依据。现报道如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　选择2012年1～6月在我院进行治疗的严重烧伤伴脓毒症患者8例为脓毒症组，其中男6例，女2例，年龄18～47岁，平均（38.1±13.2）岁。平均烧伤面积（68.3±17.5）%，平均Ⅲ度烧伤面积达（46.8±14.9）%。所有患者均符合烧伤脓毒症的诊断标准[3]。选择同期住院行整形手术的患者10例为对照组，其中男7例，女3例，年龄23～45岁，平均（36.2±14.8）岁。两组性别比、年龄比较，差异无统计学意义（P 0.05），有可比性。所有入组患者均知情同意。 　　1.2 标本采集 　　收集对照组和脓毒症组伤后3 d、5 d、7 d、14 d、21 d的静脉血标本及24 h的尿标本。所有烧伤患者在切烧伤痂时顺肌纤维方向切取肱二头肌和股四头肌标本，对照组在整形瘢痕切除术时切取股四头肌标本。所有标本分为两部分，一部分采用甲醛固定，一部分置液氮保存。 　　1.3 检测方法 　　1.3.1 血标本 采集的静脉血标本静置分层，离心，取上清液进行检测。血浆皮质醇和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）采用化学发光免疫分析法进行检测，试剂盒由上海抚生实业有限公司提供。 　　1.3.2 尿标本 采用高效液相色谱-荧光检测法测定尿中3-甲基组氨酸。试剂由美国Sigma公司提供。 　　1.3.3 骨骼肌 ①泛素系统基因表达：一步法提取组织中的总的RNA，逆转录聚合酶联反应进行扩增，引物由赛百盛生物工程技术公司提供。每份RNA中去30 μg进行变性、电泳及转膜，在膜上标记28S rRNA条带和18S rRNA条带。然后将膜放入预杂交液，65℃，共5 h。将cDNA探针加入杂交A液内变性处理，冷却后加入杂交B液中，65℃预热。弃预杂交液，在加入杂交液，过夜。室温洗膜，然后60℃洗膜15 min，2遍。滤纸吸干，-65℃放置24 h，自显影。②泛素蛋白表达：骨骼肌组织石蜡包埋、切片，层厚4 μm，化腊、脱蜡。蒸馏水冲洗，浸泡于过氧化物中，取出过氧化物酶。PBS缓冲液冲洗3次，枸橼酸盐缓冲液中95℃，10 min，进行热修复。分别采用正漏水和PBS液清洗，封闭5 min，加兔抗鼠泛素抗体，37℃ 2 h，PBS液清洗3次，加辣根过氧化物酶标记羊抗兔二抗，37℃作用1 h，PBS液冲洗3次，显色，甲基绿复染，乙醇脱水，封片，观察。 　　1.4 统计学处理 　　采用SPSS10.0统计学软件进行数据处理，计数资料采用χ2检验，计量资料采用方差分析和t检验，3-甲基组氨酸与皮质醇和肿瘤坏死因子-α水平的关系采用Pearson相关性分析。P 0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 皮质醇、