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HIV实验室检测的方法的研究进展 　　艾滋病毒即人类免疫缺陷病毒，可严重破坏人体的免疫系统，诱发严重感染及癌症，发展到最后，将会导致获得性免疫缺陷综合症。到2010年底，联合国艾滋病规划署估计全世界范围内HIV感染者约3400万，2010年内大约有260万HIV新感染者，并有180万人死于AIDS[1]。因此，HIV检测对于艾滋病的筛查、诊断、病程监控、指导治疗方案具有重要的意义。本文将简述近年来HIV实验室检测方法的研究进展，这些检测方法对于控制艾滋病毒的流行，艾滋病毒感染的诊断、筛查、监测显得尤为重要。 　　1HIV感染期间的标志物及其意义 　　在HIV感染后依次能检测到病毒RNA，p24抗原，最后是抗体[2]。在感染HIV后2w内（10~12d）,血液中病毒RNA数量呈指数级递增。当HIV感染者发展为AIDS后，机体免疫已不能抑制HIV的复制，病毒RNA数量再次呈指数级上升。因此病毒RNA水平是判断病毒复制情况以及监控病情发展的重要指标。HIV感染后的11~13d，血液中就可以检测到p24抗原。p24可作为病毒复制的间接指标。p24水平随HIV的复制而增加，并在感染后45d内保持在较高水平，但由于其检测方法较RNA检测方法灵敏度低，因此p24检出时间比RNA晚[3]。在感染HIV后的很长一段时间内，不能在宿主体内检测到HIV特异性抗体，称为“窗口期”。“窗口期”的长短由病毒的致病性和宿主的免疫能力有关。在窗口期，可以通过病毒RNA、p24抗原和CD4淋巴细胞水平来确定HIV感染。在HIV感染的整个过程中，CD4淋巴细胞水平逐渐下降，当其水平降低至200个细胞/毫升血液时，就会导致严重的免疫缺陷，HIV感染者将发展为AIDS[4]。在大部分HIV感染者体内最先出现的抗体类型是IgM。IgM一般在HIV感染后第3w出现，并在第4~5w达到峰值。然而由于个体差异及方法学灵敏度等原因，IgM并不能在每个HIV感染者血液中检出[5]。HIV特异性IgG通常在感染后3~4w出现，随后IgG滴度迅速上升，直至10~12w左右开始下降。IgG滴度的降低是由IgG3亚型的降低导致的，随后IgG滴度再次迅速增加[6]。尽管有个体可能6个月后才出现HIV抗体，但大多数HIV感染者血液中2~3个月都能检测到HIV抗体[7]。HIV抗体的出现抑制了HIV病毒的复制，并形成p24特异性抗体/p24复合体，降低了血液中的RNA及p24水平。最终，HIV感染者发展为AIDS，免疫系统崩溃，病毒再次大量复制，血液中的RNA、p24水平再次升高。因此，通过检测病毒RNA、p24抗原和CD4淋巴细胞以及HIV抗体在血液中的含量，可以诊断HIV感染及监控病情的发展。 　　2HIV实验室检测方法 　　2.1 HIV抗体检测目前，检测HIV抗体的方法多达100余种，总体来说可以分为筛查试验和确认实验。只有拥有较高灵敏度，即较低假阴性率的检测方法才能用于筛查试验。相反，确认实验对检测方法的要求是高特异性，即检测结果具有较低的假阳性率。一般情况下，筛查实验筛查出阳性的标本必须要经过确认实验再次检测，以达到确认检测结果的目的 　　2.1.1 HIV抗体筛查试验目前，酶联免疫吸附试验（ELISA）是最常用的筛查试验。1985年，美国FDA批准使用第一代ELISA检测试剂筛查HIV，可以在感染后40d左右筛查出HIV特异性抗体，第一代试剂主要以病毒的裂解产物或部分纯化的病毒抗原包被反应板，采用间接法筛查HIV。由于常混杂有细胞培养中的蛋白成分或其他杂蛋白而出现较多的假阳性反应。1990年，第二代ELISA试剂将重组或合成的多肽抗原（包括M,N,O）包被在反应板中，实现了HIV-I和HIV-II同时检测，并将检出时间缩短为33~35d。由基因重组获得的抗原具有良好的同源性，产品的灵敏度与特异度较第一代试剂有了很大的提高[8]。1992年，第三代ELISA试剂检测方法与前两代不同，采用双抗原夹心法检测抗体。由于其可以检测所有抗体亚型(包括IgG,IgM,IgA)，因此具有更高的灵敏度与特异性。第三代ELISA试剂将HIV抗体检测的“窗口期”缩短为22天左右。第四代ELISA试剂在第三代的基础上进一步增加了p24抗原的检测，可同时检测HIV抗体及p24抗原，进一步缩短了“窗口期”，减少了急性感染窗口期漏检。但由于“第二窗口期”的存在，也使得第四代试剂检测的敏感性受到影响[9]。目前，在我国第三代试剂应用最为广泛，第四代试剂还没有普及。第三代和第四代试剂的特异性大约在99.5%~99.9%，这就意味着可能会有一定假阳性的出现。假阳性结果一般是由于非特异性抗体结合HIV抗原导致的[10]。某些病毒感染的患者在进行HIV筛查时可能出现假阳性的结果。此外，患有自身免疫性疾病