pcr聚合酶链式反应 ppt课件知识讲稿.pptVIP

第一章 PCR技术原理;引物;技术难点;thermus aquaticus; ①耐高温， ②在热变性时不会被钝化，不必在每次扩增反应后再加新酶。 ③大大提高了扩增片段特异性和扩增效率，增加了扩增长度(2.0Kb)。 酶命名为Taq DNA多聚酶(Taq DNA Polymerase)。此酶的发现使被PCR广泛应用。 在?1989?年，Science?将PCR中的Taq DNA多聚酶命 名为当年的风云分子?(Molecule?of?the?year) ;1、PCR技术的基本原理;;;;;;;;3.PCR基本材料;4.PCR反应程序;5.PCR要素解析;5.PCR要素解析;5.PCR要素解析; ;5.PCR要素解析;① 长度：至少 16bp ，通常为 18-25bp。更短的引物一般会降低扩增的特异性，但会提高扩增的有效性 ② 引物的解链温度：两个引物之间的 Tm 值差异最好在 2-5℃ 。 对于小于 20 个碱基的引物其 Tm 值可用简易公式计算，即 Tm=4（G+C）+2（A+T）。 ③ 避免引物内部或引物之间形成引物二聚体（特别是引物的 3’端）。 ④ G+C 含量：尽量控制在 40% 至 60% 之间， 4 种碱基的分布应 尽可能均匀。尽量避免嘌呤或嘧啶的连续排列，以及 T 在 3‘