（毕业学术论文设计）-响应面法优化微波提取柚皮总黄酮工艺.docVIP

lw 响应面法优化微波提取柚皮总黄酮工艺 (宿州学院 化学与生命科学学院 09生物技术 指导老师： ) 摘要: 利用微波提取柚皮中总黄酮类化合物。在单因素实验的基础上，采用响应面法研究微波提取的最佳工艺条件。结果表明，以80%的乙醇为提取溶剂，微波提取最佳条件为：乙醇浓度81.4%，料液比1:33.2，提取时间6.13min，此时柚皮中黄酮的理论提取率达到了0.579%。 关键词: 柚皮；总黄酮；微波法；响应面分析； 引言 黄酮类化合物是植物经光合作用产生的一大类化合物。其结构母核是以C6C3C6为骨架的22苯基色原酮[ 1 ] 。黄酮类化合物在植物界分布很广泛，在植物中大多与糖结合成黄酮苷类，或以游离状态存在，在食物和医药工业上有着广泛的应用[ 2-3 ] 。 柚皮富含黄酮类物质，是提取黄酮类物质的理想原料。柚皮苷为柚子的主要黄酮成分[ 4-5 ]。现代药理学研究发现柚皮苷具有多种物质活性和药理作用。黄酮类化合物具有抗氧化、抗过敏、抗突变、抗肿瘤、保肝作用，保护心脑血管系统和抗病毒以及杀虫灯广泛的生理活性，且毒性较低，还可以用作食品、化妆品的天然添加剂，如甜味剂、抗氧化剂、食用色素等。 微波提取技术操作简便、省时、节能。近年来，广泛用于天然产物的浸取，有效提高了提取效率[ 7 ]。同时对天然产物的抗氧化性研究进行深入的研究[ 8-9]。 响应面分析法(RSM, Response SurfaceMethod)采用多元二次回归的方法，将多因子实验中因子指标的相互关系用多项式近似拟合，通过对函数响应面和等高线的分析，能够精确地研究各因子与响应值之间的关系 。响应面分析法能够以最经济的方式对所选实验参数进行全面的分析和研究，已经越来越多地应用于各种生物化工处理过程的优化。本文以柚皮总黄酮的得率为指标，在单因子实验的基础上，应用响应面法对柚皮总黄酮的提取工艺条件进行了优化，得到了柚皮总黄酮的最佳提取工艺，为柚皮总黄酮的开发利用提供理论依据。 1 实验材料与方法 1.1 实验材料： 蜜柚，九成熟（市售）、芦丁（中国药品生物制品检定所提供）； 无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝和氢氧化钠均为优级纯； 二次蒸馏水 1.2 主要仪器设备： FA2004型电子天平（上海精科）； 722-1 型电热恒温干燥箱（湖北省黄石市医疗器械厂）； HK-04A200 g手提式粉碎机（广州旭朗机械设备）； WD900ASL23-2 型微波炉（格兰仕）； SHZ-III 循环水多用真空泵（上海亚荣生化仪器厂）； 722型可见分光光度计 1.3 实验方法 1.3.1 实验材料的预处理 柚皮→洗净→切片→50 ℃干燥→冷却→粉碎过40目筛→制得柚皮粉。 1.3.2 芦丁标准曲线及回归方程 精确称取芦丁对照品0.01g用80%乙醇溶解，定容于100ml容量瓶中，配制成0.1g/L的芦丁对照品溶液。准确移取0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml的芦丁对照品溶液于10ml容量瓶中，用乙醇补充至3.0，加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml，摇匀后放置6min，然后加入10%硝酸铝溶液0.5ml，摇匀后放置6min；最后加入1mol/L氢氧化钠溶液4ml，用80%乙醇补充至刻度，摇匀后放置15-20min，以相应试剂做空白，于510nm处测定吸光度，制作芦丁标准曲线，线性回归得到吸光度A与黄酮质量浓度的方程：A=12.136c—0.0045，相关系数R=0.9980. 1.3.4 微波法提取总黄酮的方法 称取1.00 g柚皮粉于锥形瓶中，加入80%乙醇溶液35 mL，在解冻档下微波处理6 min (每次加热2min，放置1 min，累计达6 min) ，过滤，定容至100 mL。采用硝酸铝比色法，在510 nm处测定吸光度，计算总黄酮得率。 1.3.5 总黄酮类物质的测定 按以上方法用提取液代替芦丁实验，利用回归方程进行计算即可。 　 　 X =m1V2D／m ×100 % 式中 X———样品中总黄酮含量，mg／mL； 　　　 m1———根据标准曲线计算出待测液中黄酮的量，mg； 　　 　 m ———样品质量，g； 　　　 D ———样品的总稀释倍数； V2 ———样品提取液总体积，mL。 2 结果与讨论 2.1微波法提取总黄酮工艺条件单因素试验设计 2.1.1 乙醇浓度对总黄酮提取效果影响 称取5份1. 00 g柚皮粉分别置于锥形瓶中，在料液比固定在1:35、提取时间为5min，解冻档的条件下，分别对柚皮粉按以下不同乙醇浓度50%、60%、70%、80%、90%进行微波提取，布氏抽滤，滤渣以同样的条件提取、抽滤，合并滤液，然后用相应浓度的乙醇水溶液定容至50mL，按照制作标准曲线的方法得出柚皮中