生物技术概论-蛋白质工程.pptVIP

第六章 蛋白质工程 Protein Engineering 本章要求： 了解蛋白质的基础结构 理解蛋白质工程的研究方法 了解蛋白质工程的运用 了解蛋白质组学 第一节 概述一、 蛋白质 在自然界中，构成生命最基础的物质有： 蛋白质 最重要 核酸 最根本 多糖 脂类 蛋白质很重要具体表现在： 1）蛋白质执行着酶的功能 2）通过激素调节代谢作用 3）产生相应的抗体 4）构建各种生物膜 二、 蛋白质工程 蛋白质工程就是在蛋白质的结构与功能为基础，利用基因工程的手段，按照人类自身的需要，定向地改造天然的蛋白质，甚至创造新的、自然界本不存在的、具有优良特性的蛋白质分子。 蛋白质工程自诞生之日起，就与基因工程密不可分。 二、 蛋白质二级结构（secondary structure） 1、 定义 二级结构是指多肽链借助于氢键沿一维方向排列成具有周期性的结构的构象，是多肽链局部的空间结构（构象） 2、主要形式 α-螺旋、β-折叠、β-转角等 四种不同的α－螺旋 在平行（A）和反平行（B）β－折叠片中氢键的排列 反向β－折叠 RNase的一些二级结构 三、三级结构（tertiary structure） 三级结构主要针对球状蛋白质 是指整条多肽链由二级结构元件构建成的总三维结构 胰岛素的三级结构 四、四级结构（quaternary structure） 四级结构是指在亚基和亚基之间通过疏水作用等次级键结合成为有序排列的特定的空间结构。 四级结构的蛋白质中每个球状蛋白质称为亚基 血红蛋白的四级结构 五、蛋白质分子间的相互作用 亚基间的聚合可以被解离，可以重新聚合 四级结构的蛋白质分子亚基间可以杂交 多肽与蛋白质分子间可以聚合 常用蛋白序列和结构数据库 PDB蛋白质三维结构 SWISS-PROT蛋白质序列数据库 PIR蛋白质序列数据库 OWL非冗余蛋白质序列 EMBL核酸序列数据库 TrEMBLEMBL的翻译数据库 GenBANK核酸序列数据库 PROSITE蛋白质功能位点 SWISS-MODEL从序列模建结构 SWISS-3DIMAGE三维结构图示 DSSP蛋白质二级结构参数 FSSP已知空间结构的蛋白质家族 SCOP蛋白质分类数据库 CATH蛋白质分类数据库 Pfam蛋白质家族和结构域 七、蛋白质结构与功能的关系 1、结构决定功能 必须基团、非必须基团 2、如何利用结构执行特定的功能的呢？ 正逐步被揭示 第三节 蛋白质工程的研究方法一、蛋白质工程的研究策略 反向生物学技术 根据对天然蛋白质结构与功能分析建立起来的数据库里的数据，可以预测一定氨基酸序列肽链空间结构和生物功能； 反之也可以根据特定的生物功能，设计蛋白质的氨基酸序列和空间结构。 序列功能预测流程图 蛋白质结构预测流程图 二、 蛋白质全新设计 1、设计目标的选择 2、蛋白质设计技术与方法 序列最简化法 3、改变现有蛋白质的结构 1）基本步骤 2） 人工定点突变 M13载体法 PCR法 第四节 蛋白质工程技术的应用 一、胰蛋白酶 二、金属硫蛋白 三、人白细胞介素-2 四、组织纤溶酶原激活因子 五、枯草杆菌蛋白酶 金属硫蛋白（Metallothionein) ，简称MT 含有丰富的巯基，能螯合大量的金属离子 MT分子呈椭圆形，分子量为6500道尔顿，两个结构域拼接在一起，每个分子含7-12个金属原子，具有特殊的光吸收，构象较坚固，具有较强的耐热性。 金属硫蛋白的六大功能 1)清除体内自由基、防止机体衰老：MT是体内清除自由基能力最强的一种，其清除羟自由基的能力约为SOD的10,000倍2)解除重金属的毒性：MT的巯基基团（-SH）能强烈螯合有毒金属汞、银、铅、镉、砷、铬、镍等　　 3)参与体内微量元素的代谢：在体内，MT可根据体内微量元素的状况对锌、铜、锰、铁、钼、硒、钴、碘的吸收、储存、运输和释放等进行精细调节，使机体达到最佳生理状态。?　　 4)增强机体对各种不良状态的适应能力：当机体处于各种不良状态时，体内MT含量增加，从而提高锌、铜、锰、铁、钼、硒、钴、碘等微量元素的浓度，机体适应能力随之增强。?5)锌元素的贮存库：每100毫克锌金属硫蛋白含6.9毫克锌，肝、肾中的锌元素主要是以金属硫蛋白的形式贮存。?6)防止细胞癌变：MT可消除自由基、重金属（砷、汞、镉、铬、镍）、烷化剂、电离辐射以及紫外线对DNA、RNA、酶、蛋白质以及细胞膜的损伤，从而可以防止它们的致癌、致突变作用? 从1978年到1999年共举行了四次国际专题研讨会，我国将MT列入863重大攻关计划，1995年列入国家级[火炬计划]。 结果表