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植物组织培养;一、 植物组织培养的分类及相关概念;2 根据培养过程不同，分为 初代培养（primary culture） 继代培养（ subculture） 3 根据培养基物理状态，分为 固体培养（solid culture） 液体培养（liquid culture） ;4 相关概念 （1）外植体（explant）：由活体（in vivo） 上提取下来的，接种在培养基上的无菌细胞、组织、器官等。 （2）愈伤组织（callus）：在人工培养基上由外植体形成的一团无序生长状态的薄壁细胞。 （3）分化（differentiation）：指由受精卵经细胞分裂，引起极性生长发育成种子，经根、茎、叶生长，开花结实，形成完整植株。;（4）脱分化（dedifferentiation）：由高度分化的植物组织或器官产生无分化状态的愈伤组织的过程。 （5）再分化（redifferentiation）：将脱分化形成的愈伤组织转移到适当的培养基上继续培养，这些无定形的愈伤组织又会重新分化出根、茎、叶的完整植株的过程。;二、植物组织培养的理论依据及特点;原理：生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必须的全套基因，从理论上讲，生物体的每一个活细胞都应该具有全能性。 差异： （1）受精卵的全能性最高 （2）受精卵分化后的细胞中，体细胞的全能性比生殖细胞低。 ;潜在全能性的原因： 基因表达的选择性 科学研究表明：处于离体状态的植物活细胞，在一定的营养物质，激素和其他外界条件的作用下，就可能表现出全能性，发育成完整植株。人工条件下实现的这一过程，就是植物的组织培养。 要使细胞全能性表达出来，形成完整植株，除了生长以外，还要经过分化、脱分化和再分化等过程。 ;在正常情况下： 受精卵—分裂、分化—种子—萌发— 完整植株（具有根、茎、叶、花、果实） 在离体条件下： 离体组织、器官 （在培养基上） 细胞分裂（脱分化） 愈伤组织 再分化 完整植株（具有根、茎、叶、花、果实）;（二）植物组织培养过程： 植物体 （分离）外植体 （脱分化）愈伤 组织 （再分化）生长点 完整植株（具有 幼根、幼茎） ;;（三）植物组织培养条件： 含有全部营养成分的培养基、一定的温度、空气、无菌环境、适合的PH、适时的光照。 （四）离体器官的分化方式主要有三种； 1 、由分生组织直接分生芽 2 、由分生组织形成愈伤组织，经过再分化形成完整植株实现细胞全能性。 3 、 由游离的细胞或原生质体形成胚状体（embryoid），直接重建完整植株，或制成人工种子后重建植株;（五）植物组织培养的特点 1、优越性：可以在不受植物体其他部分干扰的情况下研究被培养部分（外植体）的生长和分化规律。 2、 特点： （1）取材少，培养材料经济 （2）人为控制培养条件，不受自然条件影响。 （3）生长周期短，繁殖率高， （4）管理方便，利于自动化控制 ; 3、重要性： （1）理论上：是研究细胞学、遗传学、育种学、生物化学和药物学等学科的重要手段。 （2）生产上：在农学、园艺、林业和次生代谢物工程等生产领域得到广泛应用。 ;三、植物组织培养的发展历史;1960年，E. C.cocking采用纤维素酶,果胶酶等酶制剂分离番茄幼根，获得大量健康的原生质体。 1962年，Murashige和Skoog在烟草培养中筛选出至今仍然被广泛使用的MS培养基。 1964年，印度科学家S. Guha和 Msheshwari培养南洋金花未成熟的花药时，发现了由大量胚状体形成的小植株（单倍体植株）。 罗士韦是我国植物组织和细胞培养研究的开拓者和奠基人之一。在30年代即开始离体根的培养，随着又进行幼胚和茎尖的培养。;70年代初期开始，我国掀起了单倍体育种的高潮，在小麦、水稻、烟草、玉米、三叶橡胶等作物上取得了一批有意义的成果。 80-90年代，全国研究工作内容明显倾向无性系的快速繁殖，许多机构开始转向应用，成为生产实体，如甘蔗、草莓、葡萄、菠萝、香蕉，各色观赏植物等。 现在，我国在原生质体培养，体细胞杂交、突变体筛选、去除病毒、次生代谢物的发酵生产、人工包装超级种子等方面都有了进步。;四、植物组织培养的应用;3、远缘杂交：利用组织培养可以使难度很大的远缘杂交取得成功，从而育成一些罕见的新物种。比如辽宁果树研究所利用这一方法获得了苹果与梨的杂交种。 4、突变育种：采用组织培养可以直接诱变和筛选出具抗病毒、抗盐、高赖氨酸、高蛋白等优良性状的品种。象中国林科院用逐步加大培养基中盐的浓度，直接获得耐盐的杨树株系。 ;5、基因工