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第二讲 固定化酶和固定化菌体 第一节 微生物酶 第二节 酶的特性 第三节 固定化酶 第四节 固定化菌体 第一节 微生物酶 一 生物催化剂——酶 二 微生物酶的优越性 三 菌体内酶与菌体外酶 2 菌体外酶 第二节 酶的特性 一 酶的催化性 二 酶的专一性 三 影响酶反应速度的因素 2 氢离子浓度 纵上所述，直接利用微生物酶—— 第三节 固定化酶 二 酶固定化后的性质变化 三 固定化酶的形态和作用模型 1 制备固定化酶的方法 2 固定化酶的形态结构模型 3 固定化酶的作用模型及其反应机理 四 酶的固定化方法举例 （一）载体结合法制备固定化酶 2 常用方法之一——共价键结合法 2 常用方法之一——共价键结合法 2 常用方法之一——共价键结合法 2 常用方法之二——离子键结合法 2 常用方法之三——物理吸附法 物理吸附法固定化酶举例 （二） 包埋法制备固定化酶 1 格子型固定化酶 （2）方法（以丙烯酰胺为材料是最常用的方法） （3）制备的固定化酶 2 微型胶囊法 （2）特点 （3）方法—— 表面聚合法、液中干燥法、相分离法 （4）微型胶囊法形成的固定化酶 （5）微型胶囊法优缺点 （三） 交联法制备固定化酶 3 酶网载体交联法 （四） 固定化酶的制法及其特性比较 五 需注意的几个方面问题 （一）酶活性的测定方法 （二）制备过程中保持酶活性稳定的方法 （三）固定化酶的保存方法 第四节 固定化菌体 固定化细胞 固定化细胞是在固定化酶的基础上发展起来的。它的优点如下: (1)省去了酶的分离手续．为多酶系统，无须辅因子再生。 (2)细胞生长快、而且多、反应快。 (3)可以连续发酵，节约了成本，而且在蒸馏和提取前不用分离去细胞，能一边徘出发酵液，一边进行培养，排除了产物抑制和消耗。 (4)保持酶在细胞内的原始状况，增加了酶的稳定、特别是对污染因子的抵抗力增加。 固定化细胞同时也存在—些缺点： (1)必须保持菌体的完整，防止菌体自溶，否则，将影响产品纯度。 (2)必须防止细胞内蛋白酶对所需酶的分解，同时，需抑制胞内其他酶的活性止副产物的形成。 (3)细胞膜、壁会阻碍底物渗透和扩散。 一 包埋法 二 载体结合法（吸附法） 包埋法制备固定化菌体应用举例 载体结合法制备固定化菌体举例 Antigenic determinant 是指抗原分子中决定抗原特异性的特殊化学基团，又称表位(epitope). 细胞克隆：由一个细胞增殖而成的细胞集团 Polyclonal antibody,PcAb：针对多种抗原决定簇的混合抗体 Monoclonal antibody,McAb:由单个B细胞克隆产生的针对单一抗原决定簇的同源抗体 杂交瘤技术的理论基础 淋巴细胞产生抗体的克隆选择学说，即一种克隆只产生一种抗体 细胞融合技术产生的杂交瘤细胞可以保持双方亲代细胞的特性 利用代谢缺陷补救机理筛选杂交瘤细胞，并克隆化，制备McAb 当两个细胞紧密接触时，细胞膜可能融合在一起。融合细胞含有两个不同的细胞核，称为异核体，产生具有原来两个细胞基因信息的单个核细胞，称为杂交细胞（hybrid cell）。 融合的结果及命运 免疫动物 培养骨髓瘤细胞 收集致敏的B淋巴细胞 收集骨髓瘤细胞 细胞融合 HAT选择培养基筛选杂交瘤细胞 检测筛选阳性细胞 克隆化培养（反复3-5次） 获得稳定分泌McAb的杂交瘤细胞株 McAb的制备（杂交瘤培养上清或诱生腹水）