靶向akt通路的非编码rna联合化疗抑制乳癌细胞生长的研究-化学工程与技术;生物分子工程专业论文.docx

l 啊!j喇喇 独创性声明 峰 、本人声明所呈交的学位论文是本人;在导师指导下进行的研究下作和取衍的 朋究成果，除了文中特别加以你液和致谢之处外，论文中不包含其他人 U经发农 成树写过的研究成果，也不包含为获得天津大学成其他教育机构的学位成证 书而使用过的材料。与我…问止;作的问志对本研究所做的任何贡献均已在论文巾 峰 、 j??，学位论文作者例:份民 m 机 010 年 d 月 a j ??， 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解 夭津大学 有关保留、使用学位论文的规边。 特授权天津大学可以将学位论文的全部成部分内容编入有关数据阵进行检 索，}f采用影印、缩印成扫描等复制于段保存、汇编以供查阅和借阅。问意学校 向闲着〈有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。 (似乎有的中位论文在解南后适用本授权说明) 啡伊 协dm 协 dmγ L 、 宁阳 导师签名: 3奈宇日期 : .J，.o fo 年 ，月3 日 德宇日期:均10 年 6 月 8 日 .‘ 11 节i， 节i，、 自喇 中文摘要 饨/ ‘ 串 (伽 、‘ AKT 通路调节肿瘤细胞的增殖、存活，与肿瘤的发生发展密切相关。阻晰该 通路的高活性，将有可能提商肿瘤治疗的效果。本课题将应用靶向 AKT 通路的 非编码 RNA 技术联合化疗，研究其对人乳腺癌细胞 MCF-7 的体外抑制作用。 应用靶向 Pl3Kp85α 的 siRNA 敲低在 MCF-7 细胞中的表达。 MT丁结果显示 PI3Kp85αsiRNA 组细胞生长速度明显小于对照组和资载体转染组:流式细胞术 表明细胞周期阻游在 GO/Gl 期，调亡比例显著提高。免疫荧光及 Westem blot 结 果均显示 PI3Kp85α 、p-AKT 、AKT-2 、Ki67 和 Bcl-2 蛋白表达的强度均减弱。 Oligofectamine 转染靶向 AKTl 的 siRNA 至 MCF-7 细胞， RT-PCR 结果表明 AKTl siRNA 组可以有效敲低 AKT1的表达水平 ;MTT 结果显示 AKTl siRNA 组细胞增殖率显著降低:流式细胞术分析细胞在 GO/Gl 期阻滞，惆亡比例明显 高于对照组与空载体转染组:免疫荧光和 westem blot 结果均表明 AKT、p-AKT 、 Ki67 、Bcl.2 几个重要癌蛋白的表达水平均布明显的下调。 重组腺病毒质粒表达载体 rAd5-siAKTl-siP13K 介导的靶向 AKTl ，PI3KP85 亚基的 shRNA 可以有效敲低 AKTl 、PI3Kp85 表达水平。下游相关因子 PCNA 、 CyclinDl 表达下调， P53 表达则上调。 MTT 法分析显示 rAd5-siAKTl-siP I3K 转 染组胞生长抑制率 50% ，流式细胞术分析结果显示出现GO/Gl 细胞周期阻滞。 2-DMatrigel 基质生长实验表明细胞贴肆生长能力明显减低， 3-DMatrigel 基质生 长实验显示 rAd5-siAKT1-siP I3K 转染组细胞形成的细胞回块较小。 探讨以 PAMAM 为载体介导 miR-21 抑制剂联合紫杉醇的抑瘤作用。联合治 疗组细胞半数抑制浓度 (IC50) 从 600nmoIL 降低到 80nmolL; MTT 结果表明联 合治疗细细胞增殖率显著降低，流式细胞仪表明细胞凋亡比例显著升高，细胞周 期的 GO/Gl 期和 S 期均被阻滞:丁ranswell 法检测联合治疗组细胞体外侵袭能力 显著F降。 Westem blot 结果表明巴GFR、p.AKT 、STAT3、p-STAT3 、自cL-2、 Cyclin Dl 、MMP-2 MM机9 蛋白的表达水平均有明怪的下调，而 PTEN 和 Caspase-3 的表达则明显上调。证明 PAMAM 介导 miR♂l 抑制剂联合紫杉醉对 乳腺癌的生长具有明显的抑制作用，可以成为治疗乳腺癌细胞的新策略。 关键词: RNA 干扰 miRNA-21 PI3K/AKT 信号传导通路乳腺癌 (JJ f 嘈 曲 w 问j ‘ ，1 ea 、 伊 f 啕 .，_， ABSTRACT 、The PI3K/AKT signaling pathway regulates many normal cellular processes including cell proliferation and survival. Small-molecule therapeutics th剖 blockAKT pathway may improve the e的ct of cancer treatmen t. In this s阳d弘 non-coding R