噬菌体抗体库构建和抗猪脂肪细胞膜单抗筛选.PDFVIP

中国农业科学 2005,38(6):1260-1263 Scientia Agricultura Sinica 噬菌体抗体库的构建及抗猪脂肪细胞膜单抗的筛选 苗向阳 1,2 ，丁淑燕 3，朱玉良 3，郝慧芳 2 ，邵建军 3 1 2 3 （中国农业科学院畜牧研究所，北京 100094 ； 中国农业大学农业生物技术国家重点实验室，北京 100094; 山东农业大学动物科技学院，泰安 27 1018） 摘要: 用猪脂肪细胞以免疫删减法免疫小鼠，取其脾细胞，RT-PCR 扩增抗体重链可变区 （VH ）和轻链可变区 （VL ）基因，克隆入噬菌粒表达载体pCANTAB5E 中，构建单链抗体（ScFv ）文库。用猪脂肪细胞，对其进行 3 轮 吸附-洗脱-富集，筛选抗猪脂肪细胞膜单抗。经 ELISA 检测，51/96 克隆具有与猪脂肪细胞结合活性，阳性率为 53%，与猪肝细胞则成阴性反应，初步证明了单抗的特异性，为猪脂肪细胞膜单抗的制备提供了一种新的方法。