造血干细胞移植-(精品课件).pptVIP

二、脐血分离与保存　　脐带血中的造血细胞可通过羟乙基淀粉沉淀法、密度梯度分离法、流式细胞仪分离法及单克隆抗体法等，物理生物学方法分离获得。冻存的主要步聚：(1)程控加入20％DMSO（每分钟加体积的5％，边加边搅拌）；（2）程控降温、冻存。 三、脐血造干血细胞扩增原因： 单个脐血中造血干细胞数量有限。另外，在脐血样品分离、冻存、融化、处理和输注等各个环节中还要损耗一部分细胞，因此不能满足成人造血细胞移植的需要。扩增过程还可清除移植物中残留T淋巴细胞和肿瘤细胞的作用，减少GVHD的发生率。 四、脐血造血干细胞移植后植活特点（1）受者外周血中性粒细胞绝对值（ANC）?5.0×109/L恢复所需时间：同胞相关供者平均为22天，而无关供者平均为24天。（2）血小板计数?5.0×109/L 恢复所需时间：同胞相关供者平均为48天，而无关供者平均为54天。 胎肝造血干细胞移植 1958年Uphoff首先发现对致死剂量照射小鼠输注胎肝细胞悬液后具有促进骨髓造血功能恢复的显著疗效。人们发现胎龄为3～6个月胎肝含有极其丰富的造血干细胞，它和骨髓造血干细胞相比，有着类似的增殖分化和重建骨髓造血功能的能力，且此时淋巴细胞量小于2％，且多为未完全分化成熟的T淋巴细胞.因此，故移植后GVHD的发生率低及严重程度轻。 一、胎肝造血细胞制备 人胎肝可以取自水囊引产、前列腺素引产正常胎儿。在无菌条件下，取得肝脏。将肝脏置于培养皿中剪成细小块。然后，投入装有双层或单层高压灭菌处理的铜网（孔径100－200目）的小烧杯，然后倒入约20ml的液体，并用10ml注射器针芯将肝组织块研磨成浆状，收集在无菌瓶中，并通过带4号针头的注射器制成单细胞悬液后备用。 三、胎肝造血干细胞分离与贮存（一）胎肝造血干细胞分离 在正常肝组织中近半数肝细胞和1％的T淋巴细胞，因此，分离除去这些非造血细胞有利于胎肝造血干细胞的超低温贮存。 采用直径为15mm的10ml角度离心管以及聚蔗糖一泛影葡胺分层液，胎肝细胞在4℃下经非连续密度梯度离心（1500转/min）20min后，收集界面层的单个核心细胞。此时，肝细胞已基本被去除，而粒巨核细胞集落形成单位（CFU－GM）回收率为74～89％。 （二）胎肝造血干细胞贮存 将分离的胎肝细胞中的单个核细胞悬液与二甲亚砜保存液1：1比例混合后，置入低温贮存袋内，然后按二步降温法降温。 造血干细胞移植 合并症和并发症 一、移植物抗宿主病二、感染：在移植过程中感染是常见的合并症,也是移植失败的重要的原因之一。三、间质性肺炎（IPN）：是All0－BMT后仅次于GVHD第二位致命性并发症，发生率约为40。 四、肝静脉闭塞病 五、出出血性膀胱炎（HE）六、渗透综合症（或称肺水肿综合症）七、移植排斥八、出血九、其它：移植后出现的晚期并发症有白内障、白质脑病、甲状腺功能低下、性腺功能低下、儿童生长发育迟缓、以及继发第二肿瘤等。 造血干细胞移植 适应症及临床应用  一、适应症及临床应用（一）急性白血病（二）慢性粒细胞白血病（CGL）（三）恶性淋巴瘤（四）多发性骨髓瘤（五）重型再生障碍性贫血（六）遗传性疾病（七）实体肿瘤 脐血造血干细胞移植前景：(1)脐血移植所需有核细胞数量较少，可供儿童应用；若进一步增加采集量，改善处理过程，其造血细胞数足敷成人移植之用。(2)脐血淋巴细胞大部分为幼稚型T淋巴细胞，功能不成熟，HLA不合的移植后，GVHD较同类骨髓移植（BMT）少而轻。 (3)脐血造血细胞进入细胞周期的细胞多，有利于基因导入，有可能成为基因治疗的理想靶细胞之一。(4)脐血造血细胞能够长期深低温保存，可作为自体移植贮备之用。(5)脐血采集不对供者造成任何痛苦和不利影响。 实验室检查主要包括骨髓、血及心、肺、肝肾功能等检查。除做与供者相同的项目外,还应查肺功能、X线胸片、如有条件者可做有关内分泌方面的检查。 入层流室当天剪指甲,剃尽全身毛发,清洁淋浴后用洗必泰液药浴20～30分钟,着无菌衣、帽、口罩,用无菌单包裹送入无菌层流室。 入室后保持无菌环境,进无菌饮食,热量、蛋白质和维生素补充要足够。 工作人员严格进行反向隔离。 4.骨髓移植前预处理 预处理目的是抑制受体免疫系统,不使移植的供体造血干细胞被受体所排斥。各疾病预处理的方案很多。 (1)再障和非肿瘤性疾病:①方案一:单一环磷酰胺(CTX)静滴。②方案二:环磷酰胺和全身照射(CTX+TBI）。(2)白血病:①方案一CTX+TBI ②方案二:CTX+柔红霉素+TBI 骨髓采集  在手术室内对供者进行骨髓采集。一般应用