肝胆排泄转运体幻灯片.pptVIP

药物排泄的研究进展 讲演人：王婷婷 2014年4月 目 录 （一）药物排泄途径 排泄途径 排泄物收集法 肾 脏 大鼠代谢笼法、导尿管法、膀胱造瘘法、输尿管法 胆 汁 胆总管插入法 乳 汁 乳头按摩收集 唾 液 腮腺与颌下腺插管收集 呼 气 密封代谢笼吸收剂收集 汗 腺 （二）转运体的分类 转运体 转运物质 典型底物 血 管 侧膜 Na+ -牛磺胆酸共转运多肽(NTCP) 胆汁酸；胆盐；胆汁酸类似物 雌酮-3-硫酸 有机阴离子转运蛋白（OATs） 阴离子化合物、中性类固醇、生理物质(如前列腺素类和甲状腺激素)和某些B类疏水性阳离子 前列腺素E2,5-氟尿嘧啶、 紫杉酚、茶碱 有机阴离子转运多肽（OATPs） 雌二醇-17β-葡糖醛酸、雌酮-3-硫酸、罗舒伐他汀、非索非那定、替米沙坦 有机阳离子转运蛋白（OCTs） 有机阳离子药物及内源性物质(胆碱、胍等) 扑热息痛葡萄糖醛酸苷、MPP+、 四乙胺、胍丁胺 （三）肝脏药物转运体 转运体 转运物质 典型底物 胆管侧膜 P-糖蛋白(P-gp) 脂溶性较高的阳性或中性药物 多柔比星、 长春新碱、红霉素、 塞利洛尔、地西泮等 多药耐药相关蛋白2(MRP2 ) 阴离子化合物及共轭代谢物 普伐他汀、替莫普利拉、 甲氨蝶呤、多柔比星、顺铂 胆酸盐外排转运蛋白（BSEP） 未共扼结合的胆酸盐 牛磺胆酸盐、甘氨胆酸盐、胆酸盐、牛磺石胆酸、牛磺鹅去氧胆酸盐、 牛磺脱氧胆酸盐、牛熊去氧胆酸盐和他莫昔芬 乳腺癌耐药蛋白 （BCRP） 某些药物的胆汁排泄 多种抗癌药如甲基蝶呤、多柔比星等 （三）肝脏药物转运体 一、体内试验 基因缺陷动物模型 先天遗传性基因缺陷模型 基因敲除模型 二、体内/体外试验 肝脏灌流技术 离体肝脏灌流 在体肝脏灌流 （四）研究肝脏药物转运体的常用方法 三、体外试验 非洲爪蟾卵母细胞：cRNA注射 单转染细胞：HEK293 双转染细胞：Hela、MDCK-П、LLC-PK1 CMVs（微管膜囊泡）实验 四、RT-PCR技术——半定量测蛋白表达 Western Blot技术——定量测蛋白表达 （四）研究肝脏药物转运体的常用方法 （五）文献研究 头孢妥仑（CDRT）胆汁排泄的分子机制及 其对肝脏转运蛋白调节作用的研究 一、实验目的 头孢妥仑 转运体(Mrp2、Bcrp或P-gp) ？转运 头孢妥仑 ？影响 (Mrp2、Bcrp或P-gp)蛋白表达 在体肝灌流 CDRT+抑制剂 CDRT 出口灌流液 胆汁 肝摄取率 胆汁累积排泄率 抑制剂是否 影响肝摄取 ？转运体参与 胆汁排泄 大鼠口服不同浓度 CDRT一周 肝组织 总RNA RT-PCR 各转运体mRNA 表达情况 膜蛋白 Western Blot 证实转运蛋白 表达情况 HPLC 二、实验思路 三、实验材料 实验动物 Wistar大鼠，雄性，体重230~250g 主要试剂 头孢妥仑标准品等 主要仪器 肝灌流仪，HPLC等 肝脏的血液供应非常丰富，接受两种来源的血供。 （1）门静脉。主要接受来自胃肠和脾脏的血液； （2）腹腔动脉的分支肝动脉。 门静脉与肝动脉进入肝脏后，反复分支，在肝小叶周围形成小叶间动脉和小叶间静脉进入肝血窦中，再经中央静脉注入肝静脉。 四、实验方法 1.肝灌流实验 肝灌流装置=灌流系统+ 恒温系统+气体交换系统 1.1.实验相关溶液的配制 (1)抗凝缓冲液的配制 枸橼酸三钠 15.6g 枸椽酸 5.7g ddH2O 600m1 (2)磷酸盐缓冲液(PBS)的配制 NaCl(58.44) 8.0g KCl(74.55) 0.2g Na2HPO4.12H2O(358.14) 2.9g KH2PO4(136.09) 加dd H2O 1000ml 调pH 7.4 with HCl (3)灌流缓冲液的配制 NaCl(58.44) 118mM 6.9g KCl(74.55)