奉化水蜜桃多酚氧化酶提取纯化工艺的研究.docVIP

奉化水蜜桃多酚氧化酶提取纯化工艺的研究 　　摘要：对奉化水蜜桃多酚氧化酶（ＰＰＯ）的提取分离工艺进行了研究，结果表明，ｐＨ值对该酶的提取率影响最大，该酶的最佳提取条件为ｐＨ值８．０，提取时间４０ ｍｉｎ，料液比１∶１２（ｍ∶Ｖ，ｇ∶ｍＬ），离子强度０．２ｍｏｌ／Ｌ。硫酸铵分级沉淀研究表明，该酶主要在硫酸铵饱和度为５０％～８０％时发生沉析，故可利用这段浓度范围对该酶进行纯化，其纯化倍数为１３．２１。同时，水蜜桃ＰＰＯ对儿茶素表现出很强的亲和性，其酶促反应米氏常数（Ｋｍ）为０．２２ ｍｍｏｌ／Ｌ，最大反应速度（ｖｍａｘ）为２５１．６９ Ｕ／ｍｉｎ。 　　关键词：水蜜桃；多酚氧化酶；提取 　　中图分类号：ＴＳ２６４．４文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）07－1450-04 　　 　　Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ Ｏｘｉｄａｓｅ ｆｒｏｍ Ｆｅｎｇｈｕａ Ｈｏｎｅｙｄｅｗ Ｐｅａｃｈ 　　 　　ＬＵ Ｌｉ－ｎａ１，LU Jie１，ＬＩＵ Ｌｉａｎｇ２，ＣＡＯ Ｓｈａｏ－ｑｉａｎ１ 　　（１． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｗａｎｌｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｎｉｎｇｂｏ ３１５１００， Ｚｈｅｊｉａｎｇ， Ｃｈｉｎａ； 　　２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Cｏｌｌｅｇｅ， Ｎｉｎｇｂｏ ３１５１００， Ｚｈｅｊｉａｎｇ， Ｃｈｉｎa） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ ｏｘｉｄａｓｅ ｆｏｒｍ ｈｏｎｅｙｄｅｗ ｐｅａｃｈ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ｔｅｘｔｓ ａｎｄ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ， ｐＨ ｖａｌｕｅ ｗａｓ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｎｚｙｍｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ， ａｎｄ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ： ｐＨ ８．０； ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ４０ ｍｉｎ； ｔｈｅ ｒａｔｅ ｏｆ ｓｏｌｉｄ ｔｏ ｓｏｌｕｔｉｏｎ １∶１２； ｉｏｎｉｃ ｓｔｒｅｎｇｔｈ ０．２ ｍｏｌ／Ｌ． Ｓａｌｔｉｎｇ－ｏｕｔ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｎｚｙｍｅ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｄ ｂｅｔｗｅｅｎ ５０％ ａｎｄ ８０％ ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｓｕｌｐｈａｔｅ， ａｎｄ ｔｈｅ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｌｄ ｗａｓ １３．２１． Ｉｎ ａｄｄｉｔｉｏｎ， ＰＰＯ ｓｈｏｗｅｄ ｈｉｇｈｌｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｔｏ（＋）－ｃａｔｅｃｈｉｎ， ａｎｄ ｔｈｅ Ｋｍ ａｎｄ Ｖｍａｘ ｖａｌｕｅｓ ｗｅｒｅ ０．２２ ｍｍｏｌ／Ｌ ａｎｄ ２５１．６９ Ｕ／ｍｉｎ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｈｏｎｅｙｄｅｗ ｐｅａｃｈ；ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ ｏｘｉｄａｓｅ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ 　　 　　桃是一种营养价值很高的水果，原产于我国，栽培历史悠久，种质资源丰富，在果树生产中占有重要地位。中国为世界产桃大国，而浙江省是中国的桃主产区之一，所产的桃果色、香、味、质俱佳，倍受消费者欢迎，在果品市场占据了重要地位。水蜜桃是浙江省地方名优产品，果实皮薄汁多，味甜质糯，口感细腻，具有较强的市场竞争力，近年来，其栽培面积及产量增加迅速。奉化是中国四大桃传统产区之一，是被国务院命名的“中国水蜜桃之乡”，现有水蜜桃种植面积不少于２ ６６７ ｈｍ２，奉化水蜜桃被誉为“琼浆玉露、瑶池珍品”。 　　水蜜桃属软果类乙烯跃变型果实，其受采后生理、表面带菌和采收季节等因素影响采后易褐变腐烂，不耐贮藏。果蔬酶促褐变主要涉及ＰＰＯ催化氧化果蔬中酚类物质的反应。ＰＰＯ是植物组织中广泛存在的一类含铜酶类，在有氧存在的条件下催化氧化单酚和二元酚变成相应的醌。Ｒｏｕｅｔ－Ｍａｙｅｒ等［１］研究发现，苹果中的ＰＰＯ可以氧化儿茶素和绿原酸，并生成醌类化合物，这些醌类化合物会促进苹果的褐变。Ｌｏｐｅｚ－Ｓｅｒｒａｎｏ和Ｂａｒｃｅｌｏ［２］分别研究了草莓中ＰＰＯ和过氧化物酶对褐变的影响，研究表明，草莓的褐变主要由ＰＰＯ引起。水蜜桃贮藏及加工过程中同样发生严重的酶促褐变，影响产品品质。因此，研究水蜜桃中引起褐变的酶类对水蜜桃的工业化有非常重要的指导作用。