新生物能源的挑战有关镍铁氢化酶研究的新进展.doc

新生物能源的挑战———有关镍铁氢化酶研究的新进展王耕霖 3张 岐廖代正( 南开大学化学系 ,天津 新生物能源的挑战 ———有关镍铁氢化酶研究的新进展 王耕霖 3 张 岐 廖代正 ( 南开大学化学系 ,天津 300071 . 3 联系人) 摘要 氢化酶是可逆分裂重组氢分子的一类酶. 由于在燃料细胞和新能源方面具有诱人的应用前景 ,成为 当今自然界向能源 、化学学科挑战课题之一. 目前发现的 4 种氢化酶中 ,镍铁氢化酶的存在最为普遍 ,研究也 最为深入. 但在活性中心结构组成和催化机理方面一直存在着不同观点和争论 ,引起许多国家学者的极大关 注. 关键词 镍铁氢化酶 活性中心结构 催化机理 功能配合物 氢能源 燃料细胞 生存在地球上的人类时刻都离不开能源. 因此在合理使用现有能源 ,治理污染的同时 ,也 在积极探索各种新型能源. 随着本世纪后半叶生物学的飞速发展 ,利用微生物来产生廉价 、绿 色能源的设想极富吸引力. 氢化酶 ( Hydrogenases , 简称为 Hases) 是存在于厌氧微生物中的一 2 H + + 2e - ) 1 , 2 . 这一发现自 70 类酶 ,其催化作用是可逆分裂重组氢分子 ( 反应为 : H2 年代末以来就引起生物化学和生物无机化学专家的高度重视 ,这些研究寄希望于得到燃料细 胞 ,或利用类似结构的模拟功能配合物通过光作用产生氢能源3 ,4 . 因此 ,对这类酶的活性中 心结构 、催化机理方面的研究一开始就引起广泛关注. 早期波谱研究结果普遍认为该酶的活 性中心仅含单核金属镍5 ～7 . 1995 年 Volbeda 等人在 Nat ure 上发表的关于 D . gi gas Ni Fe 氢化酶单晶解析8 向早期的 研究结果提出了挑战 ,从而引起了学术上的论争. 1996 年 Volbeda 等人再次发表了该酶的更 高分辨率的单晶解析结果9 ,对活性中心结构的组成又提出了新模型9 ,10 , 使得人们不得不 回头重新审视以往的研究方法和结论. 有关镍铁氢化酶活性中心结构的论争成为当今新热 点 ,据能查阅到的仅 1996～1998 年 1 月 Nat ure ,J Am Chem Soc 等国际权威杂志上涉及此领 域的论文已近 30 篇3 ,9 ～31 . 本文将在文献跟踪的基础上就酶活性中心结构的论争要点及目 前尚存在的问题进行研究分析与探讨 ,以引起我国学者在这方面的研究兴趣 ,促进这一领域的 发展. 早期推论的 NiFe 氢化酶活性中心结构 自 70 年代末发现氢化酶以来 ,对其结构表征及催化机理进行了大量的研究 ,至 1995 年前 普遍认为镍铁氢化酶 ( Ni Fe Hases ) 的活性中心仅含单核镍原子 ,这期间采用的研究方法主要 有电核双共振 ( ENDO R) 、电子顺磁共振 ( EPR) 、X 射线吸收光谱 ( XA S) 、穆斯堡尔谱 ( M?ssbauer ) 等. 研究认为 Ni Fe 氢化酶中除一些[ x Fe2 y S 原 子簇外 , 还含有单核金属 Ni 作为活性中心5 ～7 (见图 1) . 酶的活性正是由于蛋白中络合 Ni 的不同氧 1 图 1 最初推测的模型结构示意图 化态之间循环完成的 ,在此基础上提出了一些催 化机理. 关于以 Ni 为活性中心的模型配合物研究报道相继出现 化机理. 关于以 Ni 为活性中心的模型配合物研究报道相继出现 ,有些已达到氧化还原过程中 与酶各状态相吻合的程度32 . 当然也存在着少数不同的看法 ,如 Maro ney 等人4 认为 : ( ⅰ) 从 Ni ( Ⅲ) 到 Ni ( Ⅰ) 的氧还电对必须压缩在 - 400～ - 100 mV 的 300 mV 宽的电势范围内 ,这 在单个 Ni 配合物中是没有先例的 ; ( ⅱ) 采用 XA S 谱方法对 Ni 中心还原活性进行研究表明 , 若氧化酶是以 Ni 为中心的话 ,其还原反应对于每一种氧化态的改变将在边带能谱上呈现出约 2 eV 位移 ,但在对 T . roseope rsici n a 菌氢化酶的检测中没有发现明显的移动33 ,这个结果与 采用 EXA FS 分析的结果一致 ,即 Ni 位置没明显的结构变化 ; ( ⅲ) 位于 S 上的电子也可表现 出足够的自旋2轨道耦合导致观测到的 EPR 谱中的 g 值. 因此认为基于Ni ( Ⅲ) ,Ni ( Ⅰ) 氧化 态变化的机理是不可靠的4 . 但对酶中只有单核镍的观点没有异议. 单晶解析结果 1995 年 Volbeda 等人9 对 D . gi