谷氨酸的发酵工艺总体介绍.ppt

（2）离子交换法 发酵液 ↓ 稀释调pH5.0～5.5 ↓ 上柱交换 ↓ 水洗菌体及疏松树脂 ↓ 热水顶洗 ↓ 60℃4％NaOH液洗脱 ↓ 收集 ↓ 高流分 ↓ 等电点结晶 ↓ 谷氨酸 漏液（树脂再分离） 后流分（当热水用） 初流分（重上柱） 水洗树脂及疏松 ↓ 用5～6％HCl再生 ↓ 水洗树脂及疏松 过程简单、周期短，设备省、占地少，提取总收率可达80～90％，但酸碱用量大、废液污染环境。 谷氨酸的发酵工艺 一、谷氨酸产生菌 1.种类： 谷氨酸棒杆菌、黄色短杆菌、乳糖发酵短杆菌、嗜氨小杆菌、硫殖短杆菌。 我国使用的生产菌株是北京棒杆菌AS1.299、北京棒杆菌D110、钝齿棒杆菌AS1.542、棒杆菌S-914和黄色短杆菌T6~13等。 谷氨酸棒杆菌 呈一端膨大的棒状，折断分裂形成“八”字状排列 2.形态上共同特点（芽孢杆菌除外）: （1）革兰氏阳性 （2）菌体为球形、短杆至棒状 （3）不形成芽孢 （4）没有鞭毛，不能运动 （5）都是生物素缺陷型 （6）都是需氧型微生物 二、谷氨酸合成途径 1.谷氨酸合成的方式 （1）氨基转移作用 ?-酮戊二酸 + 氨基酸 谷氨酸 + ?-酮酸 （2）还原氨基化作用 ?-酮戊二酸 + NH4+ + NADPH2 谷氨酸+ NADPH + H2O 2、谷氨酸合成途径谷氨酸的生物合成过程中的几个途径 主要有： （1）糖酵解途径（EMP途径） （2）磷酸己糖途径（HMP途径） （3）三羧酸循环途径（TCA循环） （4）乙醛酸循环途径（DCA循环） （5）伍德-沃克反应（CO2固定反应） （6）α-酮戊二酸的还原氨基化反应 这6条途径之间是相互联系和相互制约的，如图所示： 葡萄糖 ②HMP 3-磷酸甘油醛 丙 酮 酸 乙酰辅酶A CO2 草酰乙酸 柠 檬 酸 苹果酸 异柠檬酸 延胡索酸 琥珀酸 NADPH α-酮戊二酸 NADPH NH4+ 谷氨酸 乳酸 乙酰辅酶A ④乙醛酸循环 乙醛酸 ①EMP ③TCA 谷氨酸 ⑤CO2固定 透过 细胞膜 ⑥α-酮戊二酸 的还原氨基化 3.谷氨酸的生物合成 过程中的几个途径 三羧酸循环（TCA） 4.谷氨酸产生菌的生化特征 （1）CO2固定能力强。 （2）?-酮戊二酸氧化能力微弱: ?-酮戊二酸脱氢酶丧失或活性低。 （3）异柠檬酸裂解酶活力微弱。 （4）谷氨酸脱氢酶活性强。 （5）还原性辅酶Ⅱ(NADPH+H+)进入呼吸链能力缺陷或微弱。 （6）不利用谷氨酸。 （7）耐高糖耐高谷氨酸。 （8）解除谷氨酸反馈抑制。 （9）具有向胞外分泌谷氨酸的能力。 谷氨酸理论转化率 如果草酰乙酸全部由CO2固定获得，则1摩尔葡萄糖生成1摩尔的谷氨酸。 C6H12O6+NH3+1.5O2→C5H9O4+CO2+3H2O 理论转化率=147/180=81.7% 谷氨酸的大量积累不是由于生物合成途径的特异，而是： （一）菌体代谢调节控制 （二）细胞膜通透性的特异调节 （三）发酵条件的适合 三、谷氨酸代谢的调控 （一）菌体代谢调节控制1.谷氨酸生物合成的调节机制 琥珀酸 ?-酮戊二酸脱氢酶（弱） ?-酮戊二酸 谷氨酸脱氢酶（强） 谷氨酸 透过细胞膜 谷氨酸 （二）细胞膜通透性的特异调节 用能积累谷氨酸菌株做如下实验: 生物素充足时,细胞内含大量谷氨酸,但培养液里几乎不含谷氨酸 用溶菌酶消化细胞壁得到的原生质体仍不分泌谷氨酸 当把原生质体放入低渗溶液里,将其涨破,谷氨酸才排出 生物素亚适量时,培养液里含大量谷氨酸,细胞里含量少 结论:谷氨酸的分泌是由细胞膜控制 控制细胞膜通透性的方法： 控制磷脂的合成； 控制细胞壁的合成：选育温敏突变株 1.控制磷脂的合成①生物素营养缺陷型 作用机制:生物素是脂肪酸生物合成最初反应的关键酶乙酰CoA羧化酶的辅酶,参与了脂肪酸的合成,进而影响脂肪酸的合成。当磷脂合成量少到正常的1/2左右时,细胞变形,Glu向膜外漏出，积累于发酵液中。 控制关键:使用该类突变株必须限制发酵培养基中生物素亚适量(5-10?g/L).在发酵初期(0-8小时),细胞正常生长,当生物素耗尽后,在菌的再次倍增时,开始出现异常形态细胞,即完成了细胞从生长型到积累型转换. 突变株 ②油酸营养缺陷型 作用机制:油酸营养缺陷型丧失了合成油酸的能力,通过控制油酸使磷脂合成量减少到正常量的1/2左右. 控制关键:保证在培养基中油酸亚适量,完成细胞从生长型到生产型的转换. 突变株 ③甘油缺陷型 作用机理：丧失L-甘油-3-磷酸(NADP氧化还原酶)，不能合成a-磷酸甘油和磷脂，只有添加甘油才能生长。在甘油限量供应下，由于控制了细胞膜中与渗透性有直接关系的磷脂的含量，使谷氨酸得