蛋白质化学StructureandFunctionofProtein.PPT

* 第 三 章 蛋白质化学 Structure and Function of Protein * 第 一 节 蛋白质的分子组成 The Molecular Component of Protein * pH=pI +OH- pHpI +H+ +OH- +H+ pHpI 兼性离子 （二）氨基酸的理化性质 1. 两性解离、等电点 两性电解质，其解离程度取决于所处溶液的酸碱度。 CH NH 2 COOH R CH NH 2 COOH R 阳离子 CH COOH R NH 3 + CH COOH R NH 3 + 阴离子 CH NH 2 COO - R CH NH 2 COO - R * 2.芳香族氨基酸紫外吸收 色氨酸、酪氨酸 芳香族氨基酸的吸收光谱 280 nm: 多数蛋白含这两种氨基酸残基，测定蛋白溶液280nm光吸收值可快速简便分析蛋白含量。 0 240 250 260 270 280 290 300 310 波 长 (nm) 光密度 色氨酸 酪氨酸 苯丙氨酸 * 3.由α-氨基参加的反应： (1) 与亚硝酸反应：放出氮气，氮气的一半来自氨基氮，一半来自亚硝酸，在通常情况下测定生成的氮气的体积量可计算氨基酸的量，此反应可用于测定蛋白质的水解程度。 * (2) 与甲醛的反应：用过量的中性甲醛与氨基酸反应，可游离出氢离子，然后用NaOH滴定，从消耗的碱量可以计算出氨基酸的含量。此法称为间接滴定法。 (3) 与2,4-二硝基氟苯（2,4-DNFB）的反应（Sanger反应）： 生成黄色的二硝基苯-氨基酸衍生物。 (4) 与苯异硫氰酸酯（PITC）反应（Edman反应）： 生成苯乙内酰硫脲-氨基酸。 (5) 与丹磺酰氯（DNS-Cl）的反应： 生成荧光物质DNS-氨基酸。 （3）、(4)、(5)反应用于蛋白质的N-末端的测定。 3.α-羧基参加的反应： (1)与碱反应成盐 (2)与醇反应成酯 (3)与酰化试剂反应成酰氯 * 4.α-氨基与α-羧基共同参加的反应 与茚三酮的反应：除脯氨酸与羟脯氨酸外，可与其它氨基酸生成蓝紫色化合物。脯氨酸与羟脯氨酸为黄色化合物。 * 5.侧链反应（颜色反应）： (1)??Millon反应：检测Tyr或含Tyr的蛋白质的反应。 Millon试剂：汞的硝酸盐与亚硝酸盐溶液。 产物：红色的化合物。 (2)??Folin反应：检测Tyr或含Tyr的蛋白质的反应。 Folin试剂：磷钼酸、磷钨酸混合溶液。 产物：蓝色的钼蓝、钨蓝。 (3)??坂口反应：检测Arg或含Arg的蛋白质的反应。 坂口试剂：α—萘酚的碱性次溴酸钠溶液。 产物：砖红色的沉淀。 * (4)??Pauly反应：检测His、Tyr及含His、Tyr蛋白质的反应。 试剂：对氨基苯磺酸盐酸溶液、亚硝酸钠、碳酸钠混合溶液。产物：橘红色的化合物。 (5) 乙醛酸的反应：检测Trp或含Trp蛋白质的反应。 当Trp与乙醛酸和浓硫酸在试管中叠加时，产生分层现象，界面出现紫色环。 (6) Cys的反应：Cys或含Cys蛋白质与亚硝基亚铁氰酸钠在稀氨的溶液中，产生一种红色的化合物。