LAMP引设计实例.pdfVIP

广州迪澳生物科技有限公司 推荐LAMP 最佳引物设计和分析流程： 1、 首选确定好需要检测的目的基因及序列（最好大于2kb ，这一步的目的是增加在最佳参数下 产生设计结果的可能） 2 、 将荣研第四版LAMP 引物设计软件设软件的各项参数均设为最佳参数 (1) 如果没有结果产生，则稍微调整或放宽CG 比 (2) 还没有结果产生，再适当放宽Tm 值 (3) 还没有结果产生，再适当调整或放宽引物间距 (4) 还没有结果产生，返回步骤(1)继续放宽CG 比，让后在放宽Tm ，按照上述步骤进 行循环。直至产生结果。（详见下页图表） 3、 导出设计结果 4 、标记出5-10 套最符合3’、5’的 ΔG 符合要求的引物(F1C 和B1C 引物的5’和其他引物的 3’尽可能的比-4 小)(这一步的目的是首先要控制反应能够特异的发生) 5、 在上述5-10 套引物中，选择荣研软件计算得出二聚体发生趋势最小的5 套 （或5 套以 内）引物(这一步的目的是在反应能够特异性发生的基础上控制引物自身扩增形成二聚体的可能) 6、 分析这5 对引物的Tm 值，选择尽可能接近要求(60 ℃和65 ℃) 的引物2-3 套 7