hns基因对大肠埃希菌生物膜形成能力的影响-OpenRepositoryof.docVIP

PAGE 5 PAGE hns基因对大肠埃希菌生物膜形成能力的影响 冯 伟，夏培元，孙艺璇，孙凤军 (400038 重庆，第三军医大学西南医院药剂科) [摘要] 目的 建立大肠埃希菌Red重组系统无痕敲除方法，探讨hns基因对大肠埃希菌生物膜形成能力的影响。方法 以大肠埃希菌MG1655为研究对象，将pKD46质粒转化入MG1655感受态细胞。以质粒pKD3为模板扩增氯霉素抗性基因片段，并将其转化入MG1655/pKD46，氯霉素抗性平板筛选阳性克隆。利用pCP20质粒删除氯霉素抗性基因，构建MG1655 hns基因缺失菌株。96孔板结晶紫染色法分析MG1655 hns基因缺失株生物膜形成能力的变化。苯酚-硫酸法检测细菌胞外多糖含量。结果 氯霉素抗性基因消除后的hns基因缺失株PCR产物长度为434bp，测序鉴定正确，成功构建MG1655 △hns基因缺失株。MG1655 △hns菌株生物膜形成能力和胞外多糖产生显著低于MG1655 (P0.01)。结论 利用Red重组技术成功构建出MG1655 △hns菌株，hns基因对细菌生物膜的形成具有重要的调控作用。 [关键词] 大肠埃希菌；生物膜；胞外多糖；hns基因；基因敲除[ [基金项目] 国家自然科学基金青年科学基金 [通信作者] 孙凤军，E-mail: fengj_sun@163.com