呼吸道病毒的微生物学检验医学演示课件.ppt

. . * 呼吸道标本的微生物检查 . * 1. 鼻咽拭子 采集时，患者用清水漱口，对光而坐，头向上仰张大口，用压舌板轻压舌根，取无菌鼻咽拭子绕过悬雍垂，在鼻咽腔、悬雍垂后侧反复涂抹数次小心取出，避免接触口腔部其他组织。 2．咽拭子 将拭子用无菌生理盐水湿润，用压舌板轻压舌根，暴露整个口咽部。先用拭子轻擦扁桃体表面后弃去，再取1支湿润的拭子轻压扁桃体，擦取挤压出的分泌物，或擦取伪膜等病变部位。 标本的采集 . * 3. 痰液标本 自然咳痰法：受检者用清水溯口数次后，用力咳嗽自气管深部将痰咳出吐至无菌容器中。对痰量少或无痰等咳痰困难者，可雾化吸入45℃左右的10%氯化钠水溶液，使痰容易排出。对于幼儿，可轻轻压迫胸骨上部气管，使其咳嗽而取之。 标本的采集 . * 血平板 巧克力平板 中国蓝平板 鼻咽拭子 直接涂片染色检查 革兰染色 异染颗粒 初步报告 白喉棒状杆菌培养 菌落形态、涂片染色 初步报告 生化反应、血清学鉴定 检验程序 常规培养 百日咳杆菌培养 血清斜面培养基 鸡蛋培养基 鲍-金培养基 亚碲酸钾血平板纯培养 菌落形态、涂片染色 . * 血平板 巧克力平板 中国蓝平板 普通培养 普通培养 普通培养 35℃、18~24h 35℃、18~24h 35℃、18~24h 痰液标本 肉眼观察 涂片染色观察 初步报告 培养前处理 菌落形态和涂片染色 生化反应、血清学鉴定 报告 检验程序 . * 1、肉眼观察：下呼吸道标本为痰液，选取脓血性的痰液用于细菌学检验。异常恶臭的脓性痰，常见于肺脓疡患者，而且可能与厌氧菌有关。痰液中有颗粒状、菌块和干酪样物质可能与放线菌病和曲霉菌感染有关。 痰液标本检验操作流程 . * 2、涂片检查：挑选痰液中脓、血性部分涂片，干燥固定后，进行革兰染色镜检。 如发现形态典型、有特殊结构，初步可以确定所属菌属或种的细菌，可直接报告。 如查见革兰阳性葡萄状排列的球菌，可报告“痰液涂片查见革兰阳性球菌，形似葡萄状”； 痰液标本检验操作流程 . * 如查见革兰阳性双球菌、矛头状、有明显荚膜时，可报告“痰液涂片查见革兰阳性双球菌，形似肺炎球菌”。 如不能直接确定菌属或种的细菌，可报告“痰液涂片查见革兰×性×菌”。如果痰片中均为鳞状上皮细胞，则应视为不合格标本。 痰液标本检验操作流程 . * 3.分离培养 取经过前处理的痰液标本分别接种血平板、巧克力平板和中国蓝平板。巧克力平板置5%—10% CO2 环境培养，其他平板于普通环境35℃孵育18—24h 。根据菌落形态，细菌染色观察，进一步进行鉴定。 痰液标本检验操作流程 . * 特殊菌的培养 1.结核分枝杆菌培养：无菌吸管加前处理标本2-3滴于罗-琴培养基35℃孵育至8周，每周观察一次； 2.嗜肺军团菌培养：取气管分泌物接种于活性炭酵母琼脂(CYE)或费-高(F-G)平板，35℃、2.5%CO2培养，每天用肉眼观察，直至第14天； 3.百日咳鲍特菌的培养：将标本直接接种在鲍-金培养基上，置有盖的玻璃缸（缸内加少量的水，并在水中加少许硫酸铜，防止细菌及霉菌生长）中，35℃ 孵育3—5天。 . * 4. 白喉棒状杆菌培养：将标本接种于血清斜面或鸡蛋培养基，35℃ 孵育8-10h观察； 5.流感嗜血杆菌培养：将标本接种于血平板和巧克力平板，并在平板中央接种一直线金黄色葡萄球菌（或四角点种），35℃、5%-10% CO2环境孵育18-24h。 6.脑膜炎奈瑟菌培养：将鼻烟拭子接种于已保温在350C的卵黄双抗平板上，35℃、5%-10% CO2环境孵育18—24h。 特殊菌的培养 . * 结果报告 1.如发现可疑致病菌落，则进行涂片染色观察、生化反应及血清学鉴定得出报告“检出x x细菌，并报告该菌在培养基中的大慨比例”； 2.如无致病菌落生长，则继续培养至48h，平板上均为咽部正常菌群生长，无可疑致病菌落生长，则报告“正常菌群生长”； 3.如虽在平板上未发现特定的致病菌，但某种常居菌比正常情况明显增多或近似纯培养，考虑可能菌群失调或菌群交替症，也可进行鉴定后报告“x x菌纯培养”或“x x菌生长旺盛”。 . * 注意事项 1.上呼吸道标本要及时送检，防止干燥。采集时尽量避免正常菌群的污染。 2.痰液标本最好采取晨痰。 3.上呼吸道有大量的正常菌群，正常情况下这些细菌并不致病，但在机体抵抗力下降或某些因素作用下，可以侵入下呼吸