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- 约 72页
- 2018-10-21 发布于上海
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查尔酮衍生物S17对胃癌细胞的作用机制研究-药学专业论文
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学位论文作者: 年 月
摘要
摘要
摘要
我们课题组前期经过设计并通过 Willimison 醚化和 Claisen–Schmid 缩合 反应合成了一系列查尔酮衍生物。通过初步的活性筛选发现编号为 S17 的化合 物在胃癌细胞中具有较好的生物活性,本文对化合物 S17 对胃癌细胞的抗肿瘤 作用机制进行了深入研究,主要研究结果如下:
1.在体外研究中发现 S17 可以有效抑制胃癌细胞 MGC803, HGC27 和 SGC7901 的增殖,其中对 MGC803 细胞生长抑制作用最为显著,而对人正常胃上皮细胞 GES1 无明显毒性,证明该化合物具有一定的选择性。
.我们用 FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡双染试剂盒来检测 10 μM S17 作用 于胃癌细胞 MGC803 不同时间段后,用流式细胞术分析对 MGC803 细胞的凋亡情 况,发现 S17 能显著诱导 MGC803 细胞的凋亡,且细胞凋亡率随 S17 作用时间增 加而明显升高。DAPI 染色观察细胞形态变化,发现化合物 S17 作用于 MGC803 细 胞后,出现细胞核变小,染色质固缩,染色加深的现象,而未处理 S17 的对照 组细胞没有出现这种现象。以上结果说明 S17 可以诱导 MGC803 细胞凋亡。
.线粒体凋亡途径是细胞凋亡的主要途径之一,这条途径主要由 Bcl-2 家 族的促凋亡和抗凋亡蛋白调控,也称内源性细胞凋亡途径。线粒体外膜通透性 增加,死亡诱导因子细胞色素 C 从线粒体释放到细胞质是线粒体凋亡途径的关 键环节,而这一环节主要由 Bcl-2 家族的促凋亡蛋白调控。释放到细胞质中的 细胞色素 C 可以引起下游 Caspases 活化的级联反应,进而诱导细胞凋亡。因此 我们检测了 Bcl-2 家族蛋白的表达和 Caspases 家族蛋白的活化。经过 JC-1 荧 光探针染色检测线粒体膜电位和 Western blot 实验,我们发现 S17 诱导了 Bcl-2 和 IAP 家族蛋白变化,线粒体膜电位下降及 Caspase-9/3 的活化。Caspases 全 酶抑制剂 Z-VAD 有效逆转了 S17 诱导的肿瘤细胞凋亡。证明 S17 激活了线粒体 介导的内部凋亡通路。
4.死亡受体介导的细胞凋亡途径,是细胞凋亡的重要途径,也称为外源性 细胞凋亡途径。死亡受体作为肿瘤坏死因子超家族成员,在外源性细胞凋亡途 径中起到关键调控作用,例如死亡受体 4(DR4)通过 Caspase 的激活引起细胞凋
I
亡,从而抑制坏死引起的细胞毒性。死亡受体 5 (DR5)因与其他 TNF 受体超家族 成员同源,又被称为 TRAIL 受体-2 或者 TRICK 2,同样在外源性凋亡信号途径 中起到非常重要的作用。所以我们检测了 S17 对 MGC803 细胞中死亡受体 DR4 和 DR5 蛋白表达的影响。结果发现,S17 可使 DR5 表达明显增加,但对 DR4 表达量 基本无影响。这些结果表明,S17 可能激活了死亡受体 5 介导的外源性凋亡通路。
5. 很多研究表明,ROS 具有抗肿瘤作用,诱导 ROS 产生是很多天然药物选 择性杀伤癌细胞的主要原因。因为高水平 ROS 可以通过氧化或硝化包括 RNA, DNA,脂肪和蛋白在内的大分子,从而引起细胞损伤。还有文献报导,细胞内 ROS 的产生还与多种肿瘤细胞凋亡相关。通过流式细胞仪,我们检测了细胞内 ROS 水平。研究发现,S17 可以使肿瘤细胞内部的活性氧水平显著升高。外源性的抗 氧化剂 NAC 可以完全阻断 S17 诱导的 ROS 水平升高,细胞的凋亡,Bcl-2 家族蛋 白表达的变化,Caspase 的活化以及线粒体膜电位下降。结果说明,引起活性氧 水平升高是 S17 引起细胞凋亡的主要作用机制。
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