多个候选基因启动子区域DNA甲基化与结直肠癌的相关性研究-肿瘤学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 独 创 性 声 明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工 作及取得研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方 外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得 宁波大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作 的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了 谢意。 若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。 签名： 日期： 关于论文使用授权的声明 本人完全了解宁波大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校 有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论 文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 （保密的论文在解密后应遵循此规定） 签名： 导师签名： 日期： 宁波大 宁波大学硕士学位论文 多个候选基因启动子区域 DNA 甲基化与结直肠癌的相关性研究 摘 要 目的：结直肠癌的演变是一个多步骤、涉及遗传和表观遗传改变的复杂过程。其中， DNA 甲基化是其发生发展中重要的表观遗传调控机制。PCDH-γ-A12, SLC19A1, CREB 和 CYLD 启动子甲基化可调控其基因表达水平，但其在结直肠癌发生发展 中的调控机制尚不明确。因此，本研究探讨 PCDH-γ-A12, SLC19A1, CREB 和 CYLD 基因启动子甲基化与结直肠癌发生发展的相关性。 方法：1、收集结直肠癌组织及正常对照组织各 42 例，整理临床病理资料。2、提取 基因组 DNA，并测定 DNA 浓度及质量。3、将基因组 DNA 进行亚硫酸盐修饰。4、 修饰后的基因组 DNA 予以甲基化特异性 PCR 扩增，并将 MSP 产物进行琼脂糖凝胶 电泳。5、随机抽取 3 份 MSP 扩增产物进行 DNA 甲基化测序。6、采用 SPSS18.0 统 计软件处理数据，分析与结直肠癌发生、转移的关联性，采用 χ2 检验，P0.05 有统 计学意义。 结果：通过甲基化特异性 PCR 和琼脂糖凝胶电泳，分析得出结直肠癌组织 PCDH-γ- A12、 SLC19A1 基因启动子 DNA 甲基化程度高于正常组织，有统计学意义（83.33% vs 57.14%，p=0.009；78.57% vs 45.24%，p=0.002）；CREB、CYLD 基因启动子 DNA 甲基化程度在结直肠癌组织与正常组织差异无统计学意义（26.19% vs 11.90%， p=0.095；14.29% vs 11.90%，p=0.746）。结直肠癌淋巴结转移组织 PCDH-γ-A12、 SLC19A1 基因启动子 DNA 甲基化程度高于淋巴结未转移组织，有统计学意义 （100.00% vs 66.67%，p=0.013；95.24% vs 61.90%，p=0.024）；CREB、CYLD 基因 启动子 DNA 甲基化程度在结直肠癌淋巴结转移组织与淋巴结未转移组织差异无统计 学意义（33.33% vs 19.05%，p=0.292；19.05% vs 9.52%，p=0.659）。通过 DNA 甲基 化测序得出结直肠癌组织 PCDH-γ-A12、SLC19A1 的甲基化特异性 PCR 扩增产物胞 I 学位论 学位论文题目 嘧啶保持不变，未转换成胸腺嘧啶，结直肠癌组织 PCDH-γ-A12, SLC19A1 基因启动 子区高甲基化；结直肠癌组织 CREB、CYLD 的甲基化特异性 PCR 扩增产物胞嘧啶转 变成胸腺嘧啶，结直肠癌组织 CREB、CYLD 基因启动子区未甲基化。并且我们研究 得出 PCDH-γ-A12, SLC19A1, CREB 和 CYLD 基因甲基化水平与结直肠癌临床特征均无 显著相关性。 结论：PCDH-γ-A12、SLC19A1 启动子高甲基化可促进结直肠癌的发生和转移，而 CREB、CYLD 启动子甲基化程度与结直肠癌则不具有显著相关性。这些发现可能为早 期发现及治疗结直肠癌提供新线索，并且 PCDH-γ-A12、SLC19A1 启动子甲基化状态 可作为结直肠癌早期诊断的肿瘤标志物，以此为靶点的药物可成为结直肠癌治疗的一 种新手段。 关键词：结直肠癌，甲基化特异性 PCR，PCDH-γ-A12，SLC19A1 II 宁波大 宁波大学硕士学位论文 Association Studies of Promoter Hypermethylation of Multiple Candidate Genes with Colorectal Cancer Abstract Objective：The development of colorectal cancer (CRC) involves both genetic