多头带绦虫四川株六钩蚴Tm45W基因的克隆与原核表达-预防兽医学专业论文.docxVIP

四川农业大学硕士论文 2010 ivi蝴蝶 目录 中文摘要川…………………山川..…………………...川 1 Abstract.……·…...…………川……·…·川…川...川..川..…..川…川…·……...…..川……… ...111 第一章文献综述…二 1 1.动物脑多头蝴病的研究进展………叫………………川……… 1 1.1 流行病学………………………………………………………… 1 1.2 生物学……………………………………………………… J 1.2.1 虫卵的生物学特性………… 2 1.2.2 脑多头蝴细胞系…………… 2 1.3 致病作用与临床症状…………………………………………………川 2 1.4 病理变化………………………………………………川 3 1.5 免疫学……………………… 4 1.5.1抗原成份分析…… 4 1.5.2 不同抗原成份免疫原性……………………川………… A 1.6 分子生物学…………………… 1.6.1 分子分樊………………… 1.6.2 抗原基因… 5 1.7 诊断与防治………………………………………川……… 7 2.带科缘虫 45W 基因的研究进展……………………………………… .8 2.145W 基因的来源…………………………………………川 8 2.245W 基因的结构及特征……………………….… ...8 2.3带科练虫 45W 蛋白 10 2.4 带科练虫 45W 疫苗及其免疫应答特点…………川 10 2.5 展望……………………………………川…………………… .13 3.实验目的和意义...……………………·……………………………………·… 13 第二章多头带练虫六钩蝴基因 Tm45W 的克隆与……… 14 原核表达，.，…，，……，.，川……… 14 1.材料与方法………………… 14 1.1 试验材料.…·…，………川………川 14 四川农业大学硕士论文 2010 1.1.1 试验样品……………川……川… 14 1.1.2 主要试剂…，……………川……… 14 质粒载体………..……..………… 14 器设备……………………………川 14 1.1.5 培养基和常用熔液的配制叫… 15 1.1.6 主要生物信息学数据库和计算机软件……………… ..17 1.2 试验方法…..……………………………… 17 1本1 多头带练虫六钩蝴的孵化与激活…………………… ..17 1.2.2 多头带缭虫六钩蝴基因 Tm45W 的克降 17 1.2.3多头带缭虫六钩蝴基因丁 m45W 的原核表达载体构建……..20 1.2.4重组 pET-32a(+)-Tm45W 质粒在大肠杆菌中的诱导表达…...23 1.2.5 重组 pE下32a(+)-Tm45W 质粒表达产物的免疫原性分析…川 27 2.试验结果 28 2.1多带练虫六钩蝴 Tm45W 基因的克隆川……川…川…… 28 2.1.1 六钩蝴丁m45W 基因的 PCR 扩增川川 28 2.1.2 重组克隆质粒的 PCR 鉴定………………… 29 降质粒的序列鉴定…… 29 隆质粒的序列分析………………………… .29 2.1.5 Tm45W 基因片断的蛋白质生物信息学分析 31 2.2 Tm45W 基因的亚克隆……………… 34 2立l 加酶切位点引物的 PCR 扩增……… ..111. 34 2.2.2 重组质粒的 PCR 与酶切鉴定川..…………………… ..34 2.3 Tm45W 基因茧组表达质粒的构建与鉴定… 35 2.3.1重组表达质粒的双酶切鉴定………………………………川 35 2.3.2重组表达质粒的序列鉴定……… 36 2.4重组表达质粒的诱导表达…………………………… 36 2.5 重组质粒表达条件的优化……………… 37 2.5.1 IP丁G 浓度的优化………………川…………… 37 2.5.2 诱导时间的优化……37 四川农业大学硕士论文 四川农业大学硕士论文 2010 ·-1· ·-1 ·1 1 2.5.3诱导激度的优化…..……川………… 38 2.6 重组表达蛋白可溶性分析… .39 2.7 融合蛋白表达产物 Westem-Blotting 检测 39 2.8 免疫前后小鼠血清抗体的 ELISA 检测结果 40 2.8.1 小鼠血清中 IgG、IgGl 和 IgG汩的检测结果…………… 40 2.8.2 小鼠血清中 IgM和陋的检测结果，...…..……川的 3.讨论…·… 45 3.1关于多头带锦虫六