多管藻别藻蓝蛋白的分离纯化及特性分析-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

烟台 烟台大学硕士学位论文 烟台 烟台大学硕士学位论文 万方数据 万方数据 万方数据 万方数据 烟台大学学位论文原创性声明和使用授权说明 原创性声明 本人郑重声明： 所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工 作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体 已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已 在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。 论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文使用授权说明 本人完全了解烟台大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即： 按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本； 学校有权保存学位论文的印刷本和电子版，并提供目录检索与阅览服务； 学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存论文； 在非保密的论文范围内，学校可以公布论文的部分或全部内容。 （保密论文在解密后遵守此规定） 论文作者签名： 导师签名： 日期： 年 月 日 摘要：本研究以海生红藻多管藻(Polysiphonia urceolata)为材料，用 50 mmol/L 的 磷酸缓冲液浸提藻胆蛋白，超滤后选用凝胶过滤、离子交换以及非变性聚丙烯酰胺 凝胶电泳(Native)方法分离、纯化出了在藻胆蛋白中含量比例最低的别藻蓝蛋 白。在实验中，成功建立了依次使用 Sephadex G-150 (G-150)、Sephacryl S-300 (S-300) 和 Sephacryl S-200 (S-200)凝胶过滤从多管藻藻胆蛋白提取液中有效分离、纯化制备 藻蓝、别藻蓝蛋白组分的技术方法。根据实验结果，对凝胶柱的选择性、柱效、内 水体积以及样品的蛋白组成等主要因素与凝胶过滤效果的相互关系进行了论述。针 对多管藻藻胆蛋白中藻蓝蛋白及别藻蓝蛋白对碱性环境敏感的特点，在经典不连续 Native系统的基础上，设计并建立了咪唑-乙酸、HEPES-咪唑/Bis-tris 以及 Bis-tris-HEPES-MES 三种能在 pH 7.0 和 pH 6.5 的条件下进行 Native的缓冲溶 液系统。所建立的 Native系统不仅为其他一些对碱性环境敏感或者无法在经 典不连续 Native系统的碱性缓冲液中分离、分析的蛋白提供了可用的电泳方 法，而且可用于 pI ??6.0 的酸性蛋白的分析、分离及制备。经 Native分离、纯 化的别藻蓝蛋白 AP1 和 AP2 分别在 654 nm 和 653 nm 有吸收峰，AP1 在 664 有荧 光发射峰，AP2 的荧光发射峰位于 666 nm， 673 nm 处有肩峰。根据光谱特性可以 确定 AP1 为别藻蓝蛋白(AP)，而 AP2 为别藻蓝蛋白-B(AP-B)。经 Native-IEF 测定， AP1 (AP)和 AP2 (AP-B)的等电点分别为 5.19 和 5.05；SDS以及二维电泳分析 表明，AP1 (AP)和 AP2 (AP-B)含有相同的 α 和 β 亚基，分子质量分别为 16.4 kDa 和 15.0 kDa，不含无色多肽，等电点分别为 5.15 和 5.07。根据 AP1 和 AP2 与 R-PC 有 非常相似的聚合体分子质量(?137 kDa)，其三聚体的亚基组成应为(?16.4?15.0)3。 关键词：多管藻，藻胆体，别藻蓝蛋白，凝胶过滤，凝胶电泳，二维电泳 烟台大 烟台大学硕士学位论文 烟台 烟台大学硕士学位论文 Abstract: In this research, phycobiliproteins of marine red macroalga Polysiphonia urceolata Grev were extracted in 50 mmol/L pH 7.0 phosphate buffer. After the ultrafiltration of the extracted phycobiliproteins, the allophycocyanin (AP) which has the lowest content in the phycobiliprotein extract was iosolated and purified by the selected methods of gel filtration, ion exchange and native. An optimized technical procedure of the AP and R-phycocyanin (R-PC) fraction isolating from the extract by the gel filtrations in turn on Sephadex G-150 (G-150), S