姜黄素通过抑癌基因HLJ1抑制肺癌细胞侵袭和转移.docVIP

姜黄素通过抑癌因子HLJ1抑制肺癌细胞的侵袭和转移 摘要 姜黄素是姜黄根的一种活性成分，它有很多种抗癌活性。在这项研究中，我们发现，姜黄素能够通过激活一种叫做热休克蛋白40的抑癌因子来抑制癌细胞的侵袭和转移。用浓度为1-20μM的姜黄素处理人肺腺癌细胞发现，肺腺癌的迁移，侵袭和转移能力对姜黄素呈现浓度依赖性，而且这种依赖性和和HLJ1的表达关系密切。而通过siRNA敲除HLJ1的表达，则能在体内和体外逆转它的抗侵袭和抗转移效应。在一篇荧光素酶的报道中关于HLJ1启动子和增强子的部分显示，在转录中姜黄素能通过在增强子里激活AP-1蛋白位点来上调HLJ1的表达。姜黄素（1-20μM）能极大地上调一种AP-1成分junD的表达,而且呈现出浓度依赖性和时间依赖性。敲除junD的表达能够部分降低姜黄素诱导的HLJ1的激活和减少姜黄素的抗侵袭效应，这表明junD从某种程度上参与了姜黄素诱导的HLJ1的表达。姜黄素能诱导c-jun胺基端激酶磷酸化，而c-jun胺基端激酶的抑制剂（sp-600125）能够减弱姜黄素诱导的c-jun和HLJ1得表达。姜黄素活化的HLJ1能够进一步引导上皮细胞钙粘蛋白的上调和癌细胞侵袭能力的下降。这是一种新的机制，支持它被应用于抗癌转移治疗中。 前言 姜黄素，姜黄根中的一种活性成分，能够通过很多种信号转导通路抑制癌细胞的增殖，侵袭，血管生成以及转移，这些通路包括factor-B, IBa kinase, Akt, activator protein (AP-1), mitogen-activated protein kinase, cyclooxygenase-2(COX-2), lipoxygenase, inducible nitric-oxide 合酶, 尿纤溶酶启动子，瘤坏死因子，化学激酶，细胞表面粘附分子，cyclin-D1等等。人类临床试验已经证实，当姜黄素给药剂量为10 g/day时，没有剂量限制毒性；当给药剂量为8 g/day时，姜黄素的血药浓度为1.77±1.87μM。这些研究表明姜黄抗癌治疗中有很大的潜力。然而对这种药物的 有趣的是，其中一个靶基因是热休克蛋白，也叫做DNAJB4,这种热休克蛋白最近被克隆并归类为HSP40家族的成员。HSPs被公认为分子伴侣。他们能够被热和很多种物理和化学应激所诱导。最近发现HSPs和人类的很多种癌症的进化相关，而且HSPs能够调节癌细胞的增殖，分化，侵袭，转移以及凋亡。某些HSPs已经被用作诊断和预后的生物标记，以及抗癌进展中的有用的新靶点。 HLJ1是姜黄素的新的候选靶点，属于HSP40家族，它见于整个细胞，并且在真核染色体中显示出很高的变异性。至少有44种基因在人类的染色体中出现过。我们曾经报道过HLJ1能够抑制肺癌细胞的增殖，抑制不贴壁细胞的生长，抑制肿瘤生成，细胞活力，侵袭以及细胞周期的进化。HLJ1的高表达和癌症的低复发率以及非小细胞癌的高存活率成正相关。在癌细胞中内源性的控制HLJ1的转录是通过转录因子YY1和AP-1调节的。这种新的抑癌基因和抑制侵袭基因HLJ1也许是一种潜在的抗癌治疗的靶点。 几项研究已经表明姜黄素能够抑制癌细胞的侵袭和转移，我们以前的研究显示姜黄素不但就能够影响金属蛋白MMP,而且能够调节抑癌基因以及抑制侵袭能力的因子HLJ1的表达。在这项研究中，我们发现姜黄素的抗侵袭和抗转移效应是通过HLJ1上调的，这种机制是通过JNK/junD途径实现的，同时它的抑制肺癌细胞的侵袭和转移是通过调节上皮细胞钙粘蛋白的表达实现的。 材料和方法 细胞株和培养条件 具有CL1-0低侵袭能力和CL1-5高侵袭能力的人肺腺癌细胞株已经被建立。人肺癌细胞株A549购自ATCC公司。细胞培养于DMEM培养基，加10%胎牛血清，并加入青霉素和链霉素（100 mg/ml），置于37摄氏度含5%CO2的培养箱中。 转移实验 癌细胞转移实验室通过划痕愈合实验评估的，通过小室的转移实验如我们以前描述的做了适当修改。 划痕愈合实验 含10%胎牛血清的细胞培养于24孔板中，待单层贴壁融合，用塑料的移液管在每个孔的细胞上划一直线的伤痕，然后用PBS缓冲液洗两次。把浓度分别为1μM，5μM，10μM，20μM的姜黄素加至小孔中，对照孔加0.1%的DMSO作为阴性对照。加完后立刻拍照，以后每隔20分钟拍一次照，直至12小时。在显微镜下，转移至空白区域的细胞数以及伤痕的宽度都作为评估的指标。本实验每个孔设三个复孔，重复三次，并且要至少两个观察者在双盲的情况下进行。 TRANSWELL转移实验 TRANSWELL转移实验是按照以前的实验进行的并做了部分的修改。简要的说，TRANSWELL膜的孔径为8 μm，直径为6.5 mm。CL1-5细胞用胰蛋白酶消化后，重悬于没有FB