产朊假丝酵母高产谷胱甘肽及富硒工艺研究-化学工程专业论文.docxVIP

摘 摘 要 万方数据 万方数据 摘 要 谷胱甘肽具有重要的生理活性，对于肿瘤、癌症、抗衰老和内分泌失调的 治疗有较明显的作用，广泛应用于在医药、食品、饲料等行业；硒对于人体有 着维持人体正常生命活动的作用，缺硒会导致克山病、肝坏死、癌症等多种疾 病的发生，硒主要以无机硒和有机硒的形式存在于自然界中，无机硒毒性较高， 有机硒具有生物活性强、吸收率高、毒性低、环境污染小等优点。通过微生物 发酵合成谷胱甘肽和硒的转化是目前最经济、安全、实用的方法。 本试验研究的内容及结论如下所示： （1）研究了新铜试剂法测定酵母提取液中 GSH 含量的可行性，考察 HPLC 和新铜试剂法测定酵母提取中 GSH 含量。对 2 种方法所测得结果做了比较，结 果表明：HPLC 法测定，准确度、精密度、回收率、以及样品的测定值均能达到 较高水平；新铜试剂法测定，准确度、回收率、以及样品的测定结果接近于 HPLC 法；由于新铜试剂法不可排除共存的其他含巯基化合物的干扰，其精密度要明 显低于 HPLC 法。新铜试剂法适用于酵母提取液中 GSH 的测定，因酵母提取液 中共存的其他含巯基化合物较少，其优点是操作简单，检测限低，测试成本较 低，适用于大规模生产的分析测定。 （2）研究了培养基及培养条件对产朊假丝酵母发酵产 GSH 的影响，考察 了胞内 GSH 的抽提方法、培养基组成及补加葡萄糖对 GSH 产量的影响。结果 显示：最佳的抽提方法为乙醇法；酵母粉与硫酸铵对胞内谷胱甘肽含量影响最 大，以硫酸铵为氮源时 GSH 含量可达到 25.48mg/g；补加葡萄糖的时间为接种 后 10h、补加量为 16mL。最佳条件下得到菌体干重为 8.14g/L，通过摇瓶发酵 GSH 产量为 113.45mg/L，GSH 产量提高了 2.89 倍。 （3）研究了平板培养基中亚硒酸钠浓度对产朊假丝酵母菌株富硒能力的诱 变情况。当平板培养基中添加亚硒酸钠时，菌株的颜色会变成红色，亚硒酸钠 浓度越高颜色越深；在亚硒酸钠浓度超过 1500mg/L 时菌株的富硒能力达到最强， 诱变后菌种富硒量是诱变前的 5.6 倍；利用选育的菌株进行实验，观察菌株数量 与亚硒酸钠浓度的关系，结果表明产朊假丝酵母对亚硒酸钠的耐受力是有限的， 当浓度超过 50mg/L 就会抑制菌体的生长。 （4）研究了发酵条件对产朊假丝酵母富硒量的影响。通过单因素的筛选， I 对酵母富硒量影响较大的三个因素为：亚硒酸钠浓度、初始 pH 及培养温度，以 胞内总硒含量为响应值，利用响应面法对其进行优化。结果显示：在培养时间 30h、加硒时间对数生长中期、亚硒酸钠浓度 35mg/L，初始 pH6.6、接种量 10%、 培养温度 27℃、装液量 150mL/500mL 的条件下，得到的菌体生物量为 6.87g/L； 胞内总硒含量达到 12639.7μg/L，硒含量为 1839.8μg/g，其中亚硒酸钠转化率为 79.1%，有机硒占 90%以上；胞内实际总硒含量与数学模型理论值 12518.8μg/L 相差不显著，响应面法能较好的优化产朊假丝酵母富硒工艺条件。 关键词：产朊假丝酵母；谷胱甘肽；新铜试剂法；富硒；响应面法 II AB ABSTRACT ABSTRACT Glutathione is an important physiological active compound, plays significant role in treatment of tumor, cancer, aging and coordination of endocrine, and so on. Glutathione is widely used in medical, food, feed and other industries. Selenium is an essential nutritional trace element, which is used to the normal physiology of human. Selenium deficiency can lead to many diseases, such as keshan disease, hepatic necrosis, cancer and other disease. In nature, the selenium in the form of inorganic selenium and organic selenium, inorganic selenium has high toxicity, organic selenium has low toxicity, strong biological activity, high absorption