聚乙二醇20k修饰与转铁蛋白偶联睫状神经营养因子的生物-ChinaXiv.PDF

聚乙二醇20k修饰与转铁蛋白偶联睫状神经 营养因子的生物活性对比研究* 1,2 1,2 2** 2 2 1,2 2** 2 迟胜男 李增兰 张纯 殷爽 冯翠 王祺 刘永东 苏志国 1 中国科学院大学，北京，100049 2 中国科学院过程工程研究所，生化工程国家重点实验室，北京 100190 摘要：为了延长重组睫状神经营养因子在体内的保留半衰期，基于CNTF 中天然的游离半 胱氨酸残基，前期工作中我们采用聚乙二醇修饰和转铁蛋白偶联的两种方式对CNTF进行 1 改造。本研究中我们采用常规分析手段对PEG20k-CNTF和Tf-PEG5k-CNTF进行对比表征。 v 6 高效凝胶过滤和动态光散射分析结果显示两者拥有相近的表观分子体积。细胞试验结果显示 6 6 两种耦合物的活性分别下降至未修饰CNTF 的50.6%和65.8%。抗体CNTF抗体亲和力结果 2 0 . 显示PEG20k修饰后亲合力下降至原蛋白的3.8%，转铁蛋白偶联后保留89.9%原蛋白亲合力。 1 1 药代动力学结果显示PEG20k-CNTF 和Tf-PEG5k-CNTF在SD 大鼠血液中的保留半衰期分 7 1 别为5.34 ± 0.26和8.65 ± 0.60 小时，与未修饰rhCNTF相比延长了约21.4倍和34.6倍。 0 2 药效学结果显示在每周两次每次 1.0 mg/kg （rhCNTF 等量）的给药频率和剂量， : v i PEG20k-CNTF 比Tf-PEG5k-CNTF 更显著地降低实验小鼠体重。 X a n i 关键词：聚乙二醇修饰；转铁蛋白偶联；睫状神经营养因子；减轻体重 h c 睫状神经营养因子(ciliary neuronotrophic factor，CNTF)被认为是一种多功能 [1] 细胞因子 。最初其主要生理功能被认为是一种可促进睫状神经元和脊髓中运动 神经元修复的细胞因子，在后来的临床试验中发现其显著抑制试验对象食物摄 取，进而导致个体体重下降的活性。进一步研究发现CNTF 抑制食欲的机理与瘦 蛋白 （leptin）的作用机理相似，都是通过作用于位于下丘脑区域的受体，进而 抑制机体对食物的摄取。然而，不同的是，CNTF 对于具有leptin 抗性的饮食诱 [2] 导肥胖型（Diet-inducedobesity,DIO）小鼠模型，仍然具有显著的抑制食欲活性 。 DIO 型肥胖被认为是与人类绝大多数肥胖患者发病机理更为相似。CNTF 抑制食 *生化工程国家重点实验室开放基金 （NO. 2014KF-05）、国家自然科学基金 （NO、北京市自然科 学基金 （NO. 2162041）。 ** 通讯作者，电子邮箱：chunzhang@ipe.ac.cn; ydliu@ipe.ac.cn 欲的同时，却不会引发饥饿感，即使在停药后体重不会出现快速反弹。因此CNTF 在肥胖疾病治疗方面具有巨大的应用潜力。 天然人源CNTF 分子量约20k Da，在第17位有一个游离的半胱氨酸。尽管 其具体的机制仍然不完全清楚，天然人源CNTF 被发现能够通过一种可饱和的机 [3]