温州医学院《分析化学》18-高效液相色谱教学材料.pptVIP

第十八章 高效液相色谱法 High Performance liquid Chromatography (HPLC);GC：流动相为惰性气体 流动相与组分无亲合作用力，仅起运载作用；组分只与固定相作用 HPLC：流动相为液体 流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、改善分离度增加了因素，对分离起很大作用 流动相种类较多，选择余地广 流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用 选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相 可以增大分离选择性;二、HPLC的特点;18.2 HPLC的分类和基本原理;18.2.1 基本原理;采用小粒度、窄分布的球形固定相，均匀装柱。A↓ 采用低黏度流动相，低流速。C ↓ ，u ↓ 液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。一般恒温操作。;18.3 各类高效液相色谱法;18.3.3 化学键合相色谱法; 适用：非极性~中等极性组分 应用最广，可解决80%的HPLC问题;2. 正相键合相色谱法;正相色谱;B + H+ ? BH+;（2）常用离子对试剂 ;4. 离子抑制色谱（ISC） ;7种四环素类抗生素对照品;其分离原理与离子交换色谱原理一样， 电导检测器检测。 问题：由于流动相都是强电解质，其电导率比待测离子约高2个数量级，这种强背景电导会完全掩盖待测离子信号。;例：分析阴离子时，以NaOH为流动相，抑制柱为高容量的强酸性阳离子交换树脂，则发生下列反应： 分离柱： 交换反应：R+—OH - + NaX——R+—X- + NaOH 洗脱反应：R+—X- + NaOH——R+—OH- + NaX 抑制柱： 与组分反应：R-—H+ + NaX——R-—Na+ + HX 与洗脱液反应：R-—H+ + NaOH——R-—Na+ + H2O;原理：利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异性亲和力，进行选择性分离。;7. 手性色谱;18.4 固定相; 化学键合固定相: 目前应用最广、性能最佳的固定相； 一般的键合相用硅胶为载体： a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C (ODS）（P502） ;（1） 载体性质;时间，min; 常见的有醚基和二羟基键合相。 此类固定相应用较少。;流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。 流动相组成改变，极性改变，可显著改变组分分离状况。;柱选择性项 影响峰间距;18.5.2 Snyder溶剂分类;表中的P′代表在正相色谱与硅胶吸附色谱法中溶剂的极性。P??大，洗脱能力大。Xe、Xd与Xn为三种作用力的相对值，三者之和为1。其数值的大小，表示作用力的强弱。;质子给予体;1 组：脂肪醚（纯质子接受体） 2 组：脂肪醇（质子接受-给予体） 3 组：吡啶衍生物、四氢呋喃（质子接受体，易极化） 4 组：乙二醇、苄醇、乙酸、甲酰胺（质子给予体） 5 组：二氯甲烷、二氯乙烷（大偶极距） 6 组：脂肪酮、酯、二氧六环、腈 7 组：芳烃、芳醚、硝基化合物 8 组：氟代醇、氯仿、水（质子给予体）;流动相类别;3. 流动相选择;选择流动相时应注意的几个问题;18.6 高效液相色谱仪;输液系统;1. 柱塞往复泵 无脉动 流量恒定 能自由调节流量 耐高压 耐腐蚀等特性;2. 梯度洗脱装置;18.6.2 进样器与色谱柱;2. 色谱柱;18.6.3 液相色谱检测器;紫外检测器的弱点;（3） 光电二极管阵列检测器（DAD）;45;光电二极管阵列检测器;2. 荧光检测器（FD）;3. 蒸发光散射检测器（ELSD）;（2） 安培检测器;18.8 HPLC的应用;2. 稠环芳烃的分析;答疑时间：2月19、21日 地点：11A-203 电话E-mail: ypcai@;53