4萃取-4萃取-(精选·公开·课件).pptVIP

双水相萃取的操作 具体实验步骤如下： (1) 配制一系列不同浓度、pH及离子强度的双水相, 每个双水相改变一个参数. 其中pH通常用磷酸盐缓冲液或氨酸调节. (2) 加入料液, 再加水使整个系统质量达到5~10g.离心管封口后充分混合; (3) 在1800-2000g下离心3-5min,使两相完全分离; (4) 小心地用吸管或移液管将上相和下相分别吸出,测定上、下相中目标产物的浓度或生物活性, 计算分配系数. 上、下两相中目标产物的总量应与加入量对比，以检验是否存在沉淀或界面吸附现象，并可确认浓度或活性测定中产生的系统误差。 后续纯化工艺 双水相萃取一步的纯化倍数只有2-5倍，进一步纯化方法： 1.反萃:PEG相中加入另一盐相，形成新的双水相体系，将蛋白质萃入盐相，同时回收PEG。 2.膜分离:分离PEG和蛋白质 3. 有机溶剂沉淀:分离效率不高 4. 层析：常用离子交换层析。高聚物／高聚物体系可以直接用离子交换柱处理。PEG／盐体系，由于盐浓度太高，先用超滤脱盐，或用疏水作用层析 双水相萃取的发展方向 新型双水相体系的开发 廉价高聚物／高聚物体系 新型功能双水相体系 双水相萃取与层析技术结合的问题高聚物／高聚物: 离子交换层析PEG／盐体系: 疏水色谱,可在高盐浓度下操作 生物分离工程 第四章 萃取（extraction） 第一讲 概述 萃取的定义