植物组织培养实验室的构建跟操作技术.pptVIP

基本设备 1.准备室：根据实验操作的性质，进行适当的分区 清洗区 培养基配制区 试剂存放区 灭菌区 基本设备 3.无菌操作室（区） 主要用于植物材料的消毒、接种等 是植物组织培养研究中最关键的部分 分区： 准备室 接种室：定期消毒，甲醛和高锰酸钾蒸汽 熏蒸 目前，大多数实验室采用超净工作台代替 基本设备 3.培养室 基本设备 4.用具 培养瓶 广口瓶 三角瓶 量筒 烧杯 容量瓶 移液管 培养皿 试管 镊子 解剖针 接种针 剪刀 用具的洗涤： 1.玻璃器皿的消毒 1）新购置，用1%稀HCL浸泡一夜，肥皂水洗净，清水冲洗，蒸馏水冲洗一遍 2）用过，清水冲洗，蒸馏水冲洗一遍，干后备用 3）已污染，高压蒸汽灭菌30min 2.金属器皿的消毒 擦净油腻，热肥皂水洗净，清水冲洗，擦干备用 用具的灭菌 高温灭菌：干热灭菌 高压蒸汽灭菌 1、名词解释：植物组织培养、愈伤组织、外植体、玻璃化、褐化 2 、说明植物离体培养的培养基制备程序。 3、说明外植体无菌接种程序。 4、说明外植体离体培养中污染的防治措施。 １、培养基种类 根据作用分： 诱导培养基：诱导外植体启动生长。 增殖培养基：诱导离体培养苗扩大繁殖。 生根培养基：诱导离体培养苗生根。 根据营养水平分： 基本培养基：包含无机盐等基本营养成分。 完全培养基：包含使植物离体生长全面营养。 1681，出现由无机盐组成的Sacks和Knop溶液，至今仍在作为基本的无机盐培养基 40年代多用White培养基 60年代至今大多采用MS等高浓度培养基（可以保证培养材料对营养的需要，由于浓度高，在配制、消毒过程中某些成分有些出入，也不致影响培养基的离子平衡） 培养基的名称，多以发明人的名字来命名，也有对某些成分进行改良称作改良培养基。 MS培养基 无机盐和离子浓度较高，硝酸盐含量较其他培养基为高。 B5培养基 含有较低的铵，双子叶植物特别是木本植物许多都适于用B5。 White培养基 1963年又作了改良，称作White改良培养基。无机机盐数量较低，适于生根培养。 N6培养基 成分较简单，KNO3和（NH4）2SO4含量高。广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花药培养和其他组织培养。 KM—8P培养基 有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素，广泛用于原生质融合的培养。 １、母液的配制和保存 母液是欲配制液的浓缩液 保证各物质成分的准确性，减少微量元素用药称量误差 配制时能快速移取，减少称药麻烦 便于低温保藏。 一般母液配成比所需浓度高10-100倍。 浓度高耐贮存，但准确度低；浓度过低不耐贮 避免不恰当混合引起沉淀 母液保存在5℃冰箱中，出现沉淀、霉变的不能使用 母液浓缩倍数=（称取药物的量×1000ml）/（每升培养基需药物量×母液体积） （１）大量元素 　可以混在一起配制成10—100倍液（常用50倍） 　高浓度的Ca2+和Mg2+会与磷酸盐混合，产生不溶性沉淀，应单独配制/或者单独配制CaCl2 也可 （２）微量元素 　可配成50-1000倍（常用100、200倍）混合母液，KI可单独配。 （３）铁盐 　硫酸亚铁和EDTA钠盐易沉淀，需单独配制，配成100—200倍鳌合剂不易沉淀。 （４）有机化合物 　维生素、肌醇、氨基酸等一起配成100或200倍液，也可分别配制。 （５）激素 每种单独配成母液储于冰箱，浓度一般为0.5－1mg/ml。一般一次只配50ml或100ml。 激素难溶于水，配制母液时用95%酒精或 1NHCl，1NNaOH溶解后再定容。 生长素类用NaOH、细胞分裂素用HCl溶解 （6）有机附加物 椰乳 液体胚乳（纱布滤渣）---80℃水浴滤液（20分钟）---过滤（去蛋白）---高温高压灭菌---冰箱保存 酵母提取液 酵母粉（加水煮沸30分钟）----过滤去渣---消毒 ２、培养基的配制及灭菌 培养基配制程序： 取适量蒸馏水放入容器　　　将母液取出混合 　　　将琼脂和糖加入容器　　　蒸馏水定容至 所需体积　　　调整pＨ　　　分装培养瓶 培养基的灭菌： 湿热灭菌法，灭菌15~20min 某些遇热不稳定的物质如IAA、ZT等进行过（抽）滤灭菌 植物细胞组织培养的成败除与培养基的组分有关外，另一个重要因素就是外植体本身，为了使外植体适于在